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溶解曲线的峰代表什么

2022.10.17

溶解曲线的峰代表:当温度高于扩增产物的TM值时,双链产物变单链,荧光值因为这样的变化而产生变化,根据这一原理,推算体系是是否会在温度变化时产生荧光值的变化。

比如用的是TAQMAN探针,taqman探针产生荧光变化的原理是探针被外切酶活性的TAQ酶剪切断而产生的,那么在只有温度变化的情况下,是没有荧光值变化的,自然就没有溶解曲线了。但是假如用的分子信标探针或者sybgreen燃料,情况就不同了。

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应用

分析real time PCR 结果的特异性:出现单峰说明扩增产物特异性好,出现杂峰特异性差,存在非特异性扩增,如引物二聚体等。一般是用SYBR Green作为荧光染料的时候使用,因为SYBR Green染料是非特异的染料,只要有扩增,染料就可以镶嵌在双链中发出荧光。

做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰,且出峰位置是你的退火温度,那么这个是你的产物发出的荧光,实验结果有效。


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