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常见发光免疫分析技术的比较（四）

2021.4.26

3.4 评价时间分辨荧光技术的不足为测量方式复杂、仪器成本及维护费用高，环境及样品中同类元素可导致本底干扰等。

3.5 代表仪器法国CIS公司1996年在欧洲推出KRYPTOR全自动时间分辨荧光免疫分析系统，用三价镧系元素铕(Eu3+)与磷酸三丁酯剂量校准曲线。近年来，该系统已可供临床实验室应用的试剂盒有肿瘤标志物、唐氏症筛查指标、性功能激素检查、心血管疾病、骨代谢、甲状腺自身免疫性疾病等。TRFlA可做双标记和多标记分析，美国PE公司的1420Victor多标记免疫分析系统集时间分辨免疫荧光分析、化学发光免疫分析、荧光分析及酶联免疫吸附分析于一机，实现一次反应多项结果，1台仪器多种功能。

4、生物发光

4.1 生物发光是生物体内发光蛋白通过消耗能量物质而产生的发光现象，其特点为只消耗能量物质，不消耗发光物质。近年来，随着越来越多的发光蛋白被提纯、其编码基因序列被测定、表达，其发光底物被人工合成，相关的基础研究和产品的商业化进展迅速。已经发现的发光蛋白包括细菌荧光素酶、虫荧光素酶、腰鞭毛虫、荧光索酶水母素及奥贝林绿色荧光蛋白等，类似的荧光蛋白还有橙色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、蓝绿荧光蛋白等。另外，目前己经被发现的生物发光底物有：虫荧光素、腔肠素、还原型黄素单核苷酸、腰鞭毛虫荧光素、种虾索等。

4.2 生物发光免疫分析法是采用生物发光物质，如虫荧光素酶或细菌荧光素酶或者转助因子(NAD+、三磷酸腺苷等)进行标记抗原抗体，使其直接或间接发光反应进行检测。如Wannlund等在1980、1982年用荧光素酶进行标记，发光免疫分析测定氨甲蝶呤和细菌荧光素酶，Terouanne在1986年采用6一磷酸葡萄糖脱氨酶标记孕酮进行发光免疫分析血清中孕酮。

4.3 生物发光免疫分析法在生物医学领域内的应用主要包括细胞学、分子生物学、卫生学、生物传感器、脂质过氧化检测和药物筛选等6个方面。其中细胞学检测主要是利用细胞内ATP导致的虫荧光索酶生物发光进行活细胞计数，目前已实现快速、动态，单细胞分析。近年来，在该领域内的应用研究又有一些进展，例如用于测定T细胞免疫活性等，同时也发现了一些新的与生物或化学发光有关的细胞学指标。分子生物学领域内的应用主要为报告基因和分子杂交，近年来又有人推出了生物发光实时DNA测序技术。卫生学检测则主要是利用分子杂交或ATP导致的生物发光检测微生物污染，有人将该技术用于尿样中的细菌总数快速测定，可在1h内完成的快速药敏试验方法。基于生物及化学发光的生物传感器主要有三类：酶固化传感器、免疫分子传感器和特异调控因子诱导的报告基因传感器。脂质过氧化检测主要是指利用化学发光检测自由基等活性物质。最近还有人分别推出了基于报告基因和细胞增殖的生物发光药物筛选系统。

5、激光免疫分析

作为激光技术在医学诊断学的新应用，美标公司医学集团DiaSorin已研究开发了COPALIS多项检测系统。国内首次见到该系统是在1998年5月的全军后勤装备展览会上，接着6月的Sino-Med也展示了该系统。COPALIS即耦联颗粒光散射技术，其耦联颗粒是由抗原一抗体、受体一激素或核酸的相互作用，在聚苯乙烯微颗粒存在下，或自身聚集，或与胶态金颗粒聚集，形成单一的和／或聚集的均相配体颗粒。当它们逐个流过一个由半导体激光形成且精确聚焦的入射光束时，会产生一个散射光脉冲，信号被光电二极管探测器记录下来，直行的激光光束则被探测器上的中央光束隔栅阻断。该系统一次可同时自动检测4种不同的分析指标，如弓形体、风疹、巨细胞和非洲淋巴细胞瘤病毒等，12 min内报告全部结果。第5个通道用来放置内部参照物，作为系统的质控检查，以确保准确性和可靠性。目前，DiaSorin正在开发可以同时检测6项指标的第2代产品，将提供从出生前的围生医学到老年医学贯穿整个生命周期的健康服务。

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周锦帆