植物基因组DNA的RFLP多态性分析
一、原理
DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间,也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restniction
fragment length
olymophorphism)。由于碱基顺序的差异,在不同的种或同一个种的不同个体之间,它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同,经特定的限制性内切酶切割后,所产生的限制性酶切片段在大小(长度)和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色,在紫外检测仪下观察,即可直接看到这种差异。电泳分离后,通过Southern杂交也可显示出已知DNA片段的差异。
二、目的
通过本实验了解不同植物或同一植物不同个体之间基因组DNA顺序的差异性,掌握DNA限制性酶切片段长度多态性研究的基本方法。
三、材料和试剂
1、从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。
2、限制性内切酶。
3、10×限制性内切酶缓冲液。
4、0.5M EDTA(pH 8.0)
5、溴化乙锭。
6、琼脂糖。
7、电泳仪和电泳槽。
四、操作步骤
(一)限制性内切酶酶切。
1、将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。
2、取8支微量离心管按下表所示作好标记
,并依次加入所需成分。
品种I | 品种II | 品种I-1 | 品种II-2 | |||||
单酶切 1# | 双酶切 2# | 单酶切 3# | 双酶切 4# | 单酶切 5# | 双酶切 6# | 单酶切 7# | 双酶切 8# | |
DNA | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
10×缓冲液 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
Eco R I | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
Hind III | 1 | 1 | 1 | 1 | ||||
无菌水 | 7 | 6 | 7 | 6 | 7 | 6 | 7 | 6 |
总体积(ul) | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
3、混匀,慢速离心2秒,使溶液全部聚于管底。
4、37℃保温2-3小时。
5、加入1/10体积的0.5M EDTA溶液终止反应。
(二)琼脂糖凝胶电泳分析
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