关于细胞冻存你了解多少呢?
细胞冻存是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。
连续培养的细胞系容易发生遗传漂变,有限细胞系终会发生衰老,所有培养的细胞都易受到微生物污染。
已建立的细胞系是一种宝贵资源,更换细胞系成本高昂,而且耗费时间。
可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。
细胞冻存流程
冻存操作步骤:
1.用移液器吸走原培养基,加入适量PBS洗1-2遍;
2.加入适量胰酶,置于培养箱中消化;
3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化,800-1000rpm离心3-5min;
4.配制冻存液,待细胞离心后去上清,加入冻存液重悬,调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL,转移到冻存管中;
5.将冻存管放入程序降温盒中,-80度过夜,然后转移到液氮中保存。
6.冻存细胞后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存。
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