瓷珠菌种保存法常见问题答疑
1、菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？
答：可以。对于霉菌等真菌需培养7 天进行保存，而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存，保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。
2、所有的菌都能保存吗？如果不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不可以保存？
答：可以。菌种保存的原理是预防或减缓DNA 复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢不活泼的状态，而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢)，并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创造的环境越接近此状态，所保存的菌种的时间就越长，所以从原理上讲，所有菌种都可用这种方法保存， 但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特殊细菌保存时，需-80℃或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。
3、能用菌种保存管永久保存菌株吗？
答：温度越低，保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1-5 年，-80℃或液氮中可保存5-10 年，不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌-20℃我们目前可以保存到6年）。但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定，确定菌株无变异。
4、菌种保藏时为什么要进行分离纯化？
答：分离纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也是菌种保存的基本原则。
5、菌种保存管对于平板来说，对挑选菌落个数有要求吗？还是将整个平板的菌落全部刮入管中？
答：对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化，要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的，所以在细菌保存的过程中，为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF，是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的，如果平板长的比较满一般半个平板就够用，具体用量也根据菌种的不同有所差异，如霉菌、酵母菌在保存时，不适合用浊度法。
6、对于液体培养基培养的纯菌，是否也可以用咱们的菌种保存管？如果可以的话，怎么操作？
答：是可以用的，如果液体培养基能保证是纯菌的话，可以直接离心，弃掉上清，然后把保存管中液体吸进去充分混匀，然后再转移到菌种保存管中，整个过程要注意无菌操作。不过，一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存，因为液体培养基中有杂菌是不易观察出来的。
7、为什么在菌种保存时，要上下颠倒？为什么不能旋摇？
答：上下颠倒，可使菌悬液充分混匀，菌株充分、均匀地吸附到小瓷珠上，旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。
8、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出？
答：吸出液体可避免反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤，加快复苏的过程，因此，要尽可能的将与菌种混匀后的保存液吸净。而常用的甘油法，在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解，在此过程中，对菌株伤害较大。
9、在使用后，菌种保存管的保存环境？需要-80℃冰箱吗？
答：本公司菌种保存管采用的是低温冷冻保存法，因此，使用后，需放置低温环境，如-20℃、-80℃或液氮中保存，而且温度越低，保存效果越好。用户需根据菌种的保存要求选择具体保存温度。
10、为什么说，如果有条件的话，菌种保存管最好置于-80 冰箱或液氮中？
答：因为，贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的伤害，同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。
11、为什么在取用菌株时，操作过程要求快速？
答：菌种保存复苏的原则，要求慢冻快融，之所以要求快速，是因为在菌种复苏的过程中, 长时间的溶解过程会对所保存的菌种造成损伤，而我们经过改良的保存方法最大程度的避免复苏所造成的影响，但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则，保证所复苏菌种的复苏率。
12、将菌株反复冻存，到底对菌株有什么影响？
答：低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶，从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到低温（不是一般冰箱）进行冷冻时，会产生冰晶，冰晶呈针状，极易导致细菌的严重损伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔，当从低温下移出并开始升温时，冰晶又会变大，故反复冻存，会对菌株造成极大损伤。
13、为什么有时候菌种的保存效果不佳？
答：1、可能是由于保存后未将保存液吸尽，反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞，影响了菌株活性。
2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种，我们建议普通菌种保存为18小时内的新鲜菌种，而霉菌需要待孢子出现后保存其孢子。
14、该产品能否用于菌种的运送，如果可以在什么条件下运送？
答：就目前试验数据而言，我们建议可主要用于普通细菌的短期运送，对于厌氧菌在运送时最好让其处于厌氧环境下，2-8℃运送不超过5 天。另外需要说明的是如弧菌属和绿脓杆菌需要常温运送，其对2-8℃温度极其敏感。
编辑：songjiajie2010
一个微生物细胞在合适的外界条件下,不断的吸收营养物质,并按自己的代谢方式进行新陈代谢.如果同化作用的速度超过了异化作用,则其原生质的总量(重量,体积,大小)就不断增加,于是出现了个体的生长现象.如果这是一种平衡生长,即各细胞组分是按恰当的比例增长时,则达到一定程度后就会发生繁殖, 从而引起个体数目的增加,这时,原有的个体已经发展成一个群体.随着群体中各个个体的进一步生长,就引起了这一群体的生长,这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量.检测微生物生长的方法
微生物的生长不同于其他生物的生长,微生物的个体生长在科研上有一定困难,通常情况下也没有实际意义.微生物是以量取胜的,因此,微生物的生长通常指群体的扩增.微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映.因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标,同时,微生物在生产实践上的各种应用或是对致病,霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关.所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法.既然生长意味着原生质含量的增加,所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据,而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上.微生物生长的衡量,可以从其重量,体积,密度,浓度,做指标来进行衡量.
生长量测定法:
1、 体积测量法:又称测菌丝浓度法
通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况.方法是,取一定量的待测培养液(如10毫升)放在有刻度的离心管中,设定一定的离心时间(如5分钟)和转速(如5000 rpm),离心后,倒出上清夜,测出上清夜体积为v,则菌丝浓度为(10-v)/10.菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标.这种方法比较粗放,简便,快速,但需要设定一致的处理条件,否则偏差很大,由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物,结果会有一定偏差.
2、 称干重发法
可用离心或过滤法测定.一般干重为湿重的10-20%.在离心法中,将一定体积待测培养液倒入离心管中,设定一定的离心时间和转速,进行离心,并用清水离心洗涤1-5次,进行干燥.干燥可用烘箱在1050C或1000C下烘干,或采用红外线烘干,也可在800℃或400℃下真空干燥,干燥后称重.如用过滤法,丝状真菌可用滤纸过滤,细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤,过滤后用少量水洗涤,在400℃下进行真空干燥.称干重发法较为烦琐,通常获取的微生物 产品为菌体时,常采用这种方法,如活性干酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料.
3、 比浊法
微生物的生长引起培养物混浊度的增高.通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值,判断微生物的生长状况.对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时,可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶.将侧臂插入光电比色计的比色座孔中,即可随时测定其生长情况,而不必取菌液.该法主要用于发酵工业菌体生长监测.如我 所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计,在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600,以此监控E.Coli的生长及诱导时间.
4、 菌丝长度测量法
对于丝状真菌和一些放线菌,可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度,或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管,到入合适的培养基,卧放,在开口的一端接种微生物,一段时间后记录其菌丝生长长度,借此衡量丝状微生物的生长.
编辑：songjiajie2010
-
焦点事件
-
标准
-
会议会展
-
标准
-
投融资
-
产品技术
-
综述
