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关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍

2022.10.19

  1.材料

  (1)微量培养盘,盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万~4万。

  (2)HT培养基

  2.操作方法

  (1)取出抗体阳性孔细胞,用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色,计数。

  (2)用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。

  (3)用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘,每孔0.05ml,细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。

  (4)5%CO2饱和湿度,37℃培养。

  (5)每天用倒置显微镜观察克隆生长情况,选择只有一个集落生长的孔,弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。

  (6)克隆大量繁殖后,布满孔底的1/3~1/2时,测培养液抗体。

  (7)抗体阳性孔细胞,移到有饲养层的组织培养瓶中,并传2~4代就可以脱离饲养细胞,建成克隆株。

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