关于myc基因检测实验方法介绍
1.模板DNA提取：参照参考文献[3]方法进行。
2.PCR扩增：PCR扩增总反应体积50 μl，应用模板DNA 50 ng，在DNA扩增仪操作(Perkin Elmer Cetus)，循环周期为94℃1分钟，55℃1分钟，72℃2分钟，经过30个循环后，补加72℃7分钟。
3.琼脂糖凝胶电泳步骤：取PCR产物5 μl加1μl上样缓冲液(0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯氰FF，40%蔗糖水溶液)之后备用。制备2%琼脂糖凝胶倒入水平式电泳槽中。待胶凝固后加样，用1×TAE缓冲液作为电极缓冲液，溴化乙锭染色，电压低于5V/cm，时间约为2小时。电泳结束后，凝胶直接在紫外透射仪上观察结果。照像，拍片后的底片在激光扫描仪上进行扫描。
4.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤：取PCR产物5 μg加1 μl上样缓冲液之后备用。制备8%非变性聚丙烯酰胺凝胶，灌注于20 cm×20 cm×0. 1 cm垂直板电泳槽中， 待凝胶聚合后加样，用1×TBE缓冲液作电极缓冲液，室温下电泳1瓦特约14小时，待指示剂溴酚蓝移到边缘时停止电泳。将电泳后的凝胶移至方盘中进行硝酸银染色。染色过程如下：用双蒸馏水(dH2O)洗凝胶3次后浸泡于染色液(硝酸银1g，加dH2O至500 ml)中30分钟，去掉染色液，用dH2O漂洗3次凝胶，然后浸泡于显色液(NaOH15g，38%甲醛3.8 ml，加dH2O至500ml)中约10分钟，当显出棕黑色DNA区带时，用dH2O洗1次凝胶后，浸于停影液(冰醋酸25 ml，加水至500 ml)中约30分钟，然后把凝胶移至固定液(乙醇25 ml，冰醋酸2.5 ml加dH2O至500 ml)中固定。固定后的凝胶在看片灯上观察结果、拍照片，凝胶直接在激光扫描仪进行扫描。
3者在第2外显子中有2个区域高度同源，3个基因分别表达各自独立的蛋白，它们的生理作用基本一致。研究表明，在许多肿瘤细胞中有Myc基因扩增或异常表达，但在不同的肿瘤组织和癌细胞系中，Myc基因家族的成员在扩增或表达方面有些差异。因此，深入研究Myc基因3个成员与人类肿瘤的关系非常有意义。本研究建立的PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-激光扫描技术，可同时检测肿瘤组织中3种Myc基因的扩增情况，在肿瘤发生发展过程中，为进行3种基因各自作用机理的研究提供了简易的实验手段。
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