对影响血细胞分析仪测定结果因素的实践分析
各级医院临床检验应用中非常广泛的仪器之一就是血细胞分析仪，随着计算机技术的快速发展和数据处理技术的日新月异，血细胞分析仪的自动化水平和可检测维度也越来越高，给临床检验带来了极大的方便性和准确性。笔者在基层医院的临床应用中，积累了许多检测数据和病例，并进行了对比分析，结合实际进一步探究了影响血细胞分析仪测定结果的实践因素。
1 环境温度的干扰
实验室环境温度决定了仪器、试剂以及标本的温度,计数时稀释液的温度应为( 22±4) ℃ 。当稀释液的温度低时,红细胞溶解后的膜碎片聚集, 粒度分布曲线的平坦段变短,当试剂温度低于18 ℃时需加热使用。有些溶血剂在低温时可出现结晶, 并不容易被察觉,很难引起操作者的注意,但在显微镜下, 可见到其中悬浮着许多细小的结晶,这样的溶血剂滴入血液中,白细胞计数必然增高。我们基层医院地处北方，这种情况在实际操作中时有发生,尤其是在冬季。血细胞分析仪分析不出稀释液在低温时产生的聚合结晶，常使分析结果出现异常。在临床中可以将溶血剂或稀释液进行加热，以升高温度, 消除结晶。还可加入适量的非离子表面活性剂,从而减轻溶血剂结晶的发生。低温也易激活血小板,引起血小板凝集, 造成血小板计数假性降低。
2 抗凝剂的影响
ABX60血液细胞分析仪检测EDTA-K2 含量不同的静脉血,临床结果表明EDTA-K2 有效抗凝剂量在1.5~ 6. 0mg/ mL时,不影响分析结果。自制抗凝瓶EDTA-K2 用量1.5~ 2.2mg/ mL为宜。低于1. 5mg/mL时抗凝效果欠佳, 出现肉眼不易发现的凝集,可表现为血小板降低。在采血时，一般2mL的采血量,其误差在± 0. 5mL范围内的话比较适宜。血量过多或过少都会对结果造成影响,血量过多抗凝不充分,会出现凝块;血量过少, 会导致抗凝剂过浓。笔者分析认为，由于血细胞遇抗凝剂先有一个短暂的(1~ 2min) 收缩过程, 这是因为钾离子进入血浆以后,改变了渗透压,导致水从细胞内流出所致。随后细胞将钾离子泵进膜内,细胞又恢复原态。绝大部分患者的标本这一时间只需要几分钟, 但也有人需要20~ 30 min。抗凝剂过浓会延长这个平衡时间。
3 标本放置时间的影响
笔者通过观察总结，发现标本存放3~ 6 h对多数血液分析参数均有不同程度的影响, 主要影响WBC和PLT 结果。但有部分标本在放置的8h内大部分参数没有显著改变， 而平均血小板体积、血小板分布宽度、大血小板比率和血小板压积在2h内却有明显增高。笔者认为，标本放置时间过长会导致细胞分层, 分层的细胞会产生不同的代谢物,形成微环境,此时, 细胞的体积与其周围的微环境相适应, 重新混匀后需重新建立平衡, 最初的1~ 2min收缩,达到平衡约需30min。这一现象对血脂较高的标本影响更为显著。
测定时间对血小板的影响更为显著,在一定的时间段内, 随着时间的延长, 抗凝剂与血液充分溶融, 松散聚集的血小板逐步解聚,血小板数值逐步升高。实际操作中, 由于急需报告结果(尤其是急诊标本) 而使待测时间缩短, 往往导致血小板计数结果偏低。
4 生理和病理因素的干扰
在临床实践中,笔者有时会发现应用血细胞仪对新生儿血液进行分析时,使用正常量溶血剂计数白细胞, 各项结果与实际有差异。笔者认为, 由于新生儿处于特殊的生理缺氧状态,其红细胞数和血红蛋白都高( Hb> 200g/ L)。常规溶血剂用量不能将红细胞完全破坏, 加大溶血剂用量, 可以使白细胞正确分类, 计数准确。因此, 在新生儿血液分析中掌握好溶血剂用量是获得可靠结果的关键。
病理因素也可影响血液分析的结果, 在某些疾病的影响下,当平均红细胞体积小于70fL时,血小板计数假性升高, 这时需用显微镜人工计数才能得到准确的结果。
5 采血因素的影响
自动血细胞分析仪要求静脉采血,且一针见血。若采血技术不熟练,不能一针见血, 致使采血时间过长,混入组织液成分及血液长时间滞留于采血器中, 容易引起血小板的活化和聚集,形成肉眼不易察觉的微小凝块, 致使血小板计数结果假性降低。采血后应及时混匀, 使抗凝剂与血液充分接触, 发挥抗凝作用。对于末梢血( 手指血) 的采取, 则影响因素更大, 采血时如穿刺不深,挤压过甚,导致血小板凝聚, 组织液渗入等, 最终致使结果不准确。所以采取末梢血时, 穿刺要深, 尽量使血液自然流出,尽量避免用力挤压。由于采血不当, 而引起的溶血对血小板计数结果也会有影响, 常使血小板计数增高。通常血小板和红细胞在20~ 30fL之间有重叠。计数血小板时易受小红细胞以及红细胞碎片的影响, 而使血小板的计数假性增高。因此,临床检验中发现溶血标本,应重新采血或显微镜进行血小板直接计数可使结果可靠。
综上所述,血细胞分析仪在临床使用过程中有着手工法无可比拟的优点,但也存在着许多干扰因素,不同程度地导致分析结果的不可靠,因此在实际工作过程中,涂片显微镜检查显得格外重要。仪器是由人来操作的,实验人员的思想和技术素质是实验的保证,实验人员必须有一定的理论知识、实践经验和高度的责任心,保证仪器正常运转,保证结果准确、可靠,才能为临床提供科学、真实的依据。
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