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逆转录酶的合成步骤

2022.9.16

1、使用前每个组份轻轻混匀,然后2000rpm离心20s

2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管,依次加入2~5μgRNAnμL

3、65℃保温5min,然后冰浴5min;

4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份

RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL

10×M-MLVReactionBuffer2μL

DTT(200mM)1μL

逆转录酶(M-MLV)1μL

5、轻轻混匀后,然后2000rpm离心20s;

6、先在37℃保温1hr,然后70℃保温15min;

7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。


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