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DNA合成仪合成原理

2021.12.27

DNA的:即DNA3'端固定于基质上,然后沿3'向5'方向依次添加直至合成所需的DNA片段。不同于应用的DNA合成。

合成过程:

第一个碱基的3‘末端固定在树脂上,下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用保护,然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。

1.个碱基的5’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯,

2.然后用碘氧化成磷酸三酯

3.加入除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT

循环进行加入下一个碱基合成完毕后

1.用除去5’-OH上的保护剂DMT

2.用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开,洗脱

3.用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂

4.除去氢氧化铵,真空抽干

5.或者PAGE,回收片段最长的。


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