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沙眼衣原体检测存在问题的再探讨

2021.5.20

沙眼衣原体(CT)足引起非淋菌性尿道炎(NGU)的主要病原体之一。在沙眼衣原体枪测方面，胶体金检测卡应用最为普及。但其灵敏度存在的问题已影响了临床人员对沙眼衣原体检测必要性的认识和可靠性的信心。笔者曾就沙眼衣原体检测存在的一些问题进行过探讨，现结合经验，进一步探讨沙眼衣原体检测存在的问题。

衣原体抗体检测试剂的可靠性问题

目前衣原体抗体检测试剂多是检测IgG抗体，而衣原体在人群中广泛存在，许多正常人也有低滴度抗体水平，单纯根据一次IgG抗体测定，很难判断病人是既往感染还是现症感染，只有再次检测衣原体抗体滴度，若增加方可判为衣原体阳性。

这要求抗体检测试剂应为定量试剂，而目前国内间接ELISA和胶体金检测衣原体抗体的试剂都是定性试剂，说明在临床检验工作中为什么有些病人检测衣原体抗体为阳性而用其他方法检测则为阴性，这在一定程度上影响了疾病的确诊。

此外，衣原体抗体检测试剂存在特异性差的缺点，这是因为微生物在进化过程中会形成一些相同的抗原表位，而此类试剂盒采用的抗原大都是提纯抗原而不是基因重组抗原(即使足基因重组抗原也存在该问题，只不过程度上偏轻而已)，存在多个抗原表位，沙眼衣原体与其他微生物之间产生交叉也就有其必然性。

2胶体金检测卡检测沙眼衣原体抗原灵敏度低的问题

2.1方法学上存在的问题胶体金检测卡检测沙眼衣原体抗原，在方法学上存在灵敏度低的问题。方法学采用双抗体夹心法，而检测的抗原——脂多糖(简称LPS)是一种小分子，抗体则是蛋白质大分子。由于蛋白质分子不l司基团之问空间位阻的存在，作为双抗体要夹的“心”不易被夹住，即固相单抗不易与已和胶体金标记的单抗结合的衣原体抗原再结合，这就可能导致漏检，致使检测卡的灵敏度偏低。事实上，目前以双抗体夹心检测小分子的试剂盒质量普遍不如检测大分子的试剂盒质量。

2.2抗原提取方法存在的问题胶体金检测卡检测沙眼衣原体，在抗原提取方法上也存在导致灵敏度低的问题。检测所用的标本是分泌物，沙眼衣原体寄生在被糖蛋白包围的上皮细胞内，抗原存在于沙眼衣原体细胞壁上，处于紧密结合状态，因此检测的前提是提取抗原。目前，胶体金检测卡有两种抗原提取方式，一是高温提取，二是强酸提取。对于高温提取抗原，作为抗原的LPS在80℃时才能提取出来，而在82℃时又分解，如此狭窄的温度范围势必会引起抗原提取不出来或提取出的抗原分解，导致灵敏度低。对于强酸提取抗原，强酸在分解细胞壁的同时，会与LPS接触，因为酸处理都有一个时间过程，一般是10 min，所以这个接触也有一个时间过程，在此过程中很难保证LPS不被强酸分解，而为了降低LPS被强酸分解的可能，降低酸的浓度或缩短处理时间又影响LPS的提取，同样也会导致检测卡的灵敏度降低。事实上，通过分泌物检测微生物抗原的试剂可能都存在这个问题。其他一些通过分泌物检测的微牛物如淋球菌、支原体、白念珠菌和滴虫，由于淋球菌、支原体和自念珠菌有高质量培养基，滴虫可以镜检，所以胶体金检测卡得不到大范围的应用，但对于沙眼衣原体，镜检、培养、PCR都比较麻烦，使用胶体金检测卡是不得已之举。

2.3检测沙眼衣原体抗原的胶体金检测卡所用的单抗可能存在血清型或人种的差异。事实上笔者发现，某一进口沙眼衣原体胶体金试剂在我国西藏地区的检出率与生产地报道的检出率比较接近，即25％左右，而在我国内地检出率则低得多，不到10％。笔者据此分析沙眼衣原体胶体金试剂所用的单抗可能存在血清型或人种的差异。

3沙眼衣原体检测的金标准问题

沙眼衣原体由于缺乏产生能量的系统，必须依赖宿主获得ATP，因此不能像细菌一样对其用人工合成的培养基进行培养，而需要在细胞活体内才能完成，所以沙眼衣原体检测的金标准是细胞培养。但细胞培养由于分离培养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间长，且敏感性受标本采集、运送、保存等的影响较大，因此沙眼衣原体的细胞培养尚难以在医疗单位检验科开展，这就在很大程度上影响了沙眼衣原体新诊断试剂临床评价的科学性。目前沙眼衣原体新诊断试剂临床评价一般采用“扩大的金标准”(expanded gold standard)，即以两种方法检测的结果为真阳缈真阴性结果，这一点无论在国内还是国外基本形成了共识。然而医疗单位检验科往往以胶体金检测卡作为评价衣原体新诊断试剂的标准，而衣原体胶体金检测卡的灵敏度存在严重问题，这样的评价很难得到科学的结论。

4医务人员的学术道德问题

衣原体胶体金检测卡使用的是分泌物标本，需要根据参评方法的种类取多份标本。分泌物标本不像血清，很难保证标本的一致性，这样出现一些差异就在所难免，评价结果有一定的不符合率也是合理的。笔者发现公开发表的评价沙眼衣原体诊断试剂的文章，有许多涉及衣原体胶体金检测卡，不但与金标准方法有极高的符合率，而且不同文章报道的阳性率差别也比较大，从10％一40％均有出现，固然有采样人群不同、季节差异等引起的因素，但同样的试剂出现这么大的差别以及论文与理论以及事实的悖论都值得商榷。

5小结

上述问题的存在已严重影响沙眼衣原体检测技术的临床推广。事实上从21世纪初，一些原先开展沙眼衣原体检测的医疗单位已逐渐减少甚至停止沙眼衣原体的检测，而同期在欧美沙眼衣原体的检测已作为不孕不育、NGU及常规体检的必查项目。为了对临床沙眼衣原体感染引起疾病进行有效地辅助诊断和预后监测，提高我国沙眼衣原体的临床检验水平，亟待相关部门对沙眼衣原体检测存在的一些模糊问题，特别是前述问题进行研究，做出定论。

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周锦帆