ASA抗精子抗体ELISA试剂盒使用说明（一）
1、说明
在西方国家，不孕夫妇的比例占总人群的10-15%（Haas et al，1980）。目前人们还不能精确的知道由免疫学因素导致不孕的发病率是多少。由于有很多不同的检测方法，人们对抗精子抗体在不孕中的作用存在着很大争议。在检测抗精子抗体的传统检测方法中，精子凝集检测和精子固定检测已被广泛应用。这些方法及其它凝集检测都很耗费时间，并且结果与其操作不协调。与传统的检测方法相比，用ELISA检测抗精子抗体具有很多优点。IBL公司的抗精子抗体ELISA试剂盒结合这些优点，并同时还具有高灵敏度和高特异性的特点。此试剂盒操作简单，并且可以检测很多种血清。
注意：此实验的附加信息可从IBL网址（http://www.IBL-Hamburg.com）上获取，或直接向汉堡IBL公司索取。
2、实验原理
IBL公司的精子抗体酶免试剂盒提供了人血清和精液中抗精子表面抗原抗体定量检测所需要的实验材料。
此检测试剂盒利用的是非竞争性的原理。包被在包被板微孔中的精子表面抗原是从池子中提取到的，它采用的方法是Alexander在1984年所提及到的那种方法。将疑似免疫学不孕病人的血清（已稀释好）加入到包被孔中温育，之后洗板，再加入过氧酶标记的抗人免疫球蛋白（IgA，IgG和IgM）并温育。温育后洗板，再加入TMB底物液，并酶标仪检测所显示的颜色强度。微孔中所显示的颜色强度与结合的免疫球蛋白浓度成正比。实验结果可从标准曲线上读取，结果单位为units/ml。
3、注意事项和预防措施：
1) 试剂仅供体外诊断和专业人士使用。
2) 试剂盒所中有害物质的信息请见材料安全数据单。
3) 试剂盒中的所有试剂包括检测过的人血清/血浆对HIV/II，HbsAg和HCV都表现为阴性，但是试剂中会出现此类病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原体的可能性都不能完全被排除。因此，所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理。
4) 请不要用嘴吹试剂，不要将试剂和样品接触皮肤和黏膜。
5) 样本和试剂盒试剂处理场所，请勿吸烟、饮食和使用化妆品。
6) 处理样品和试剂时请戴橡胶手套，微生物污染的试剂和样品会导致错误的实验结果。
7) 按照相应的国家生物安全管理条理公认的方法处理样品和试剂。
8) 请勿使用过期试剂
9) 按照说明书中所规定的体积（加样体积和预处理步骤）进行实验操作。使用校准的移液器时才可以得到理想的实验结果。
10) 按照国家生物安全管理条理，实验中的化学物质和所使用或准备的试剂应当当作有害废物处理。
11) 产品的材料安全数据能够从IBL公司主页上载可直接咨询IBL公司获取。安全数据单符合下列标准：EU-Guideline 91/155 EWG， ANSI-Standard，ISO-Sstandard 11014，OSHA（US）。
4、试剂盒组成
4.1试剂盒成分
试剂瓶上标出的量都是理论体积，所有的试剂瓶都装满了试剂。成分低于250μl的溶液，请注意：所有的溶液都在试剂瓶的底部。
4.1.1包被板，12×8孔，微孔中包被了精子表面抗原。
4.1.2标准品，3支，冻干粉，将每支冻干粉溶解于1ml的洗涤液中。重新配制好的标准品（标准品S5）100μl内含500mU抗精子抗体。
4.1.3酶联物，601倍浓缩，1支，100μl，内含过氧酶标记的抗人IgG、IgA、IgM，使用前用稀释液按1：601的比例进行稀释。
4.1.4 TMB底物液，1瓶，10ml，即用，内含TMB及稳定剂。
4.1.5 TMB终止液，1瓶，10ml，即用，内含1M的H2SO4，注意：避免皮肤接触。
4.1.6洗涤液，20倍浓缩，1瓶，50ml，用双蒸水按1：20的比例稀释，配置好的洗涤液在2-8℃的环境下可稳定存放4周。
4.1.7稀释液，3瓶，冻干，每瓶用20ml洗涤液稀释，配置好的稀释液在2-8℃的环境下可稳定存放2天，如果冻存于-20℃的环境下则可存放更长时间。
4.1.8质控血清，3支，冻干，每支用1ml的洗涤液稀释。质控血清应在每次实验时临时配置，并且仅能使用一次。质控血清的可接受范围请见质量质控单。
4.1.9封板纸，5片
4.10实验所需器材但试剂盒不提供
1）校准的精密移液器及取样吸头：0-20μl，10-100μl，100-1000μl
2）多道移液器，50-200μl
3）洗板机及洗涤瓶
4）37℃温育器
5）带450nm滤光片的酶标仪
4.2试剂盒的储存与稳定性
试剂盒应当2-8℃的环境下运输。包被板条一但被拆开，应当将其重新密封好。拆开了板条储存于2-8℃的环境下时，其免疫活性可稳定6周。
4.3试剂的准备
实验开始前将所需数目的板条和所有试剂都平衡到室温。试剂盒可分3次进行检测，下面所述体积可用来检测4条包被板条（32个检测孔）。如果实验中需使用更多板条，则体积应当相应的进行改变。
4.3.1洗涤液，在30ml浓缩的洗涤液中加入600ml双蒸水。
4.3.2稀释液，在每支冻干的稀释液中加入20ml即用型的洗涤液。
4.3.3标准品、质控血清
a）S5（500mU/100μl），将每支标准品用1ml即用型的洗涤液进行稀释。重新配制好的标准品（标准品S5）100μl内含500mU抗精子抗体。
b）其它浓度的样品可用稀释液进行连续稀释获得，具体如下：
S5 500mU/100μl
S4 250mU/100μl= 500μl S5 + 500μl稀释液
S3 125mU/100μl= 500μl S4 + 500μl稀释液
S3 62.5mU/100μl= 500μl S3 + 500μl稀释液
S2 31.3mU/100μl= 500μl S2 + 500μl稀释液
S0 0 mU/100μl= 500μl稀释液（零标准品）
-
焦点事件
-
焦点事件
-
焦点事件
