细胞计数和活力测定实验方法
器材和试剂：
1. 倒置相差显微镜，具有10×物镜；
2. 标注体积刻度的试管（圆锥形底）；
3. 改良的Neubauer血细胞计数器；
4. 计数器盖玻片；
5. 袖珍管或等体积的塑料容器，如试管或离心管；
6. 巴斯德吸管（短型和长型）；
7. 可调体积的微量加样器（100—250μl）；
8. 无菌枪尖；
9. 无菌刻度吸管（1—10ml）、洗耳球或自动移液装置；
10. 10g/L台盼蓝；
11. Hanks平衡盐溶液或储存培养基；
实验方法：
1. 准备计数器。轻轻地湿润中央网络区域的各个边，用两个拇指的压力使盖玻片水平地从边缘滑动。当在中央标记区临近的任何一边能看见牛顿环（彩虹色）时，盖玻片位置正确；
2. 1000r/min离心细胞悬液5min，弃上清。将细胞重悬于已知体积的培养基中；
3. 用巴斯德吸管来回吹打细胞悬液几次，混匀，确定细胞均匀分散；
4. 用微量加样器吸取250μl混匀的细胞悬液，转入袖珍管。用一个干净的加样器尖吸取等体积台盼蓝溶液加入细胞悬液中。用拇指和食指快速轻弹袖珍管几次使之混匀。立即用一个巴斯德吸管尖吸取一滴细胞悬液，轻轻地将其滴在临近计数区的盖玻片边缘上。毛细作用使细胞悬液移到盖玻片下面，填满中央和边缘沟之间的区域。在盖玻片的另一边重复该操作；
5. 将计数器放于显微镜载物台上，移动载物台直到将三条平行线界定的25个小方格的网格位于中央为止。计25个小方格内的总细胞数（染色和未染色的）（它们每一个又再分为16个更小的方格便于计数）。为了避免将同一个细胞重复计数，只数三线隔开的压上线、左手线和中央区的细胞。如果细胞数大可用一个计数器；
6. 数完总细胞数时，在相同区域重复计数，只数蓝染（死）的细胞。计算死细胞的平均数，从总细胞数中扣除死细胞数得到活细胞数；
7. 应用以下公式计算细胞群的存活率：
存活率=活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%
8. 细胞悬液的细胞浓度按照一下方法计算：
1个大格（25个小格）的平均细胞数×104=细胞数/ml
9. 细胞悬液总细胞数=细胞数/ml×总体积
10. 细胞悬液总的活细胞数=总细胞数×存活率（%）
-
产品技术
