单克隆抗体上清制备实验——大量制备
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 重复基本方案 1 步骤 1，并按 1:10 分传到终体积为 100 ml 的完全 DMEM-10/ HEPES 中。 2. 准备传代细胞时，应将 175 cm2 培养瓶中的内容物（100 ml) 转移到一个 850 cm2 旋转培养瓶中，另加 150 ml 完全 DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，置于转瓶培养装置上于 37℃ 培养 1～2 天。 3. 用饱蘸 70% 乙醇无菌海绵擦拭旋转培养瓶的瓶盖和瓶颈，打开瓶盖，加入 250 ml 完全 DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，再在转瓶装置上培养 1～2 天。 4. 如步骤 3 所述擦拭瓶盖及瓶颈。打开转瓶，加入大约 2L 的完全 DMEM-10/HEPES 直至几乎满了（总体积约 2.5L)。为了避免泡沫，先加入无血清培养液，最后加入 FCS 至终浓度为 10%。盖紧瓶盖，并置转瓶培养装置上，37℃ 培养直至培养液变黄色（大约 5 天)。 5. 将培养液倒入无菌的 250 ml 的锥形离心管中，室温下 250 g 离心 20 min, 收集上清并分装冻存。如果上清不准备用于生物学检测，可加 10% 叠氮钠溶液至终浓度为 0.02%。如果上清准备进行亲和层析或盐分级沉淀，那么最好先经 0.45 μm 滤器滤过除菌，以清除碎片。 |
| 注意事项 | 每个 175 cm2 培养瓶中的培养物最终可以接种到 2.35～2.5 L 的培养液中。如果用蛋白亲和层析法从上清中纯化 MAb，可期望得到 1～10 mg MAb/L。通常不必将细胞放入无血清的培养液中适应和培养（这种做法常会降低产量）。如果用蛋白质 A-亲和层析法从上清中纯化 MAb, 应该单独检测使用 FBS 的培养液是否有污染，即被其他蛋白污染），污染物有可能与 MAb 同时被纯化。新生胎牛血清常含有显著量的 1 g，它将与蛋白质 A 结合，因此这种血清不可以用于配制培养液。 |
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