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跳台实验相关-Wnt 非经典途径对小鼠阿尔茨海默...（二）

2020.5.25

1． 2． 3 小鼠海马组织 IL － 1β、IL － 6、TNF － α 的测定术后第 2 天给药处死小鼠，断头，取脑组织 0． 2 ～ 1． 0g，在生理盐水中漂洗，除去血渍，用生理盐水制成 10%匀浆液。将匀浆液以 3 000 rpm 离心 5 min 后，取出上清液，冷冻。严格按照放射免疫试剂盒( 购自北京福瑞润康生物技术有限) 说明步骤操作，测定计算海马每毫克组织中 IL － 1β、IL － 6、TNF － α 的含量。

1． 3 统计学方法所得数据采用 SPSS 13． 0 软件进行统计学处理并作比较分析。数据以均数 ± 标准差( x珋± s ) 表示，计量资料采用 t 检验，计数资料采用 χ2检验。P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。

3 讨论

阿尔茨海默病( AD) 是一种神经系统退行性疾病，多见于 70 岁以上的老人，且女性较男性多，65 岁以前发病者称为早老性痴呆，65 岁以上发病者称为老年性痴呆。主要表现为记忆力障碍、失语、视空间技能损害、执行功能障碍等特征，目前还没有明确的病因，可能的因素和假说多达 30 余种。家族史是该病的危险因素之一，某些 AD 患者的家属患同样疾病者比率高于一般人群，还可能有先天愚型患病的危险，可见痴呆与遗传有关。一些甲状腺疾病、免疫系统疾病等躯体疾病，曾被作为该病的危险因素研究。伴有意识障碍的头部外伤也被作为该病危险因素，而且有较多报道。此外研究猜测，免疫系统的进行性衰竭等，以及独居、生活颠簸等社会心理因素也可能成为发病的诱因。由于发病因素涉及很多方面，绝不能单纯地用药物治疗。根据认知能力和身体机能的恶化程度可以分为轻度痴呆、中度痴呆、重度痴呆三个时期。第一个时期一般表现为记忆减退、判断能力下降、工作漫不经心、情感淡漠、常有多疑等症状; 第二时期一般表现为远近记忆严重受损、简单结构的视空间能力下降、不能独立进行室外活动、出现各种神经症状、常走动不停等症状; 第三个时期患者已经完全依赖照护者，日常生活不能自理。对患者进行检查时主要是运用神经心理学测验、血液学检查、神经影像学检查、脑电图( EEG) 、脑脊液检测、基因检测等方法。目前临床上对阿尔茨海默病治疗的目的是控制伴发的精神病理症状，主要会出现焦虑、抑郁、精神病等精神病理症状，选择相应的药物可以对其进行治疗。此外还要用到益智药或改善认知功能的药，延缓疾病进展。作用于神经递质的药物可以加强中枢胆碱能活动，改善老年人的学习、记忆能力。脑代谢赋活药物可以扩张脑血管，增加脑皮质细胞对氧、氨基酸等的利用，改善脑细胞的功能，提高记忆力。大量研究已经证实阿尔茨海默病发生的病理过程与 Wnt 信号通路的功能异常存在密切的关系。目前主要是通过干细胞的移植并激活其内在的 Wnt 信号通路来促进新生海马神经元的产生，以弥补海马神经元的丢失来治疗阿尔茨海默病。细胞因子 IL － 1β、IL － 6、TNF － α 在中枢神经系统中起到重要的作用，有助于机体的生长发育和内环境的稳定，在病理状态下，这些细胞因子异常表达，发生炎症反应，损伤组织细胞，氯化锂( Li Cl) 在发挥药物作用时主要通过 Wnt 非经典等信号途径，对一些异常细胞因子的表达和活性具有明显的抑制作用，对神经细胞、心肌细胞具有保护作用，改善患者的记忆和判断能力。Li Cl 作为高度选择性的抑制剂，在科研工作中用于 Wnt 非经典信号途径的激动，在心肌细胞分化等过程中起到了重要作用，通过抑制细胞因子 IL － 1β、IL － 6、TNF － α 的活性来改善心肌细胞。

本研究采用基底核注射海人藻酸建立阿尔兹海默症模型，导致 nb M 胆碱能大神经元溃变，从而损害从nb M 到新皮层的胆碱投射系统，大脑皮层和海马胆碱乙酰转移酶活性和乙酰胆碱酯酶活性降低，最终导致明显的学习和记忆功能改变。在记忆研究中，一个最重要的动物模型就是抑制模仿活动或学习习惯。被动回避实验通过动物学会去掉某种特定的行为而逃避某种讨厌的事情。小鼠跳台实验操作简便易行，一次可同时观察多只动物，能较客观地反映动物经过一次刺激后记忆获得的情况，可分析益智药物的作用机制。本实验结果表明，正常对照组与假手术组在行为学方面无明显差异( P ＞ 0． 05) ; 但是与假手术组比较，模型组、低剂量组的被动回避次数在训练的 5 d 内均明显升高( P ＜ 0． 05) ，而高剂量组、中剂量组无明显差异( P ＞ 0． 05) 。与模型组比较，高剂量组、中剂量组小鼠被动回避次数在训练的 5 d 内均明显降低( P ＜0 ． 01 ) ，低剂量组自训练的第 15 天开始被动回避次数也明显降低( P ＜ 0． 05) 。结果表明，高剂量组、中剂量组能显著改善小鼠的学习记忆成绩，且疗效均优于低剂量组。经药物干预后，细胞因子 IL － 1β、IL － 6、TNF － α 明显下降(

P ＜ 0 ． 05 ) ，中剂量组、高剂量组下降更显著( P ＜ 0． 05) 。

4 结论

总之，高、中剂量氯化锂能显著改善小鼠的学习记忆成绩，且疗效均优于低剂量氯化锂，氯化锂 Wnt 非经典途径对小鼠阿尔茨海默病模型起积极的作用，有助于改善阿尔茨海默病。

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