基质辅助激光解吸离子化(MALDI)
基质辅助激光解吸离子化技术是采用短的脉冲激光(1-10ns)使样品分子离子化后进入质谱仪分析。MALDI以激光照射靶面的方式提供离子化能量,样品底物中加入某些小分子有机酸作为质子供体。一般MALDI的操作是将液体样品加入进样杆中,经加热、抽气使之形成结晶。将进样杆推入接口,在激光的照射和数万伏高电压的作用下,肉桂酸可以将质子传递给样品分子使之离子化,经高电场的“抽取”相“排斥”作用直接进入真空。
20世纪90年代初,MALDI开始与飞行时间质谱连接使用,形成商品化的基质辅助激光解吸-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)。MALDI技术所产生的离子在飞行管中由于所需飞行时间的差异而得到分离。MALDI-TOF具有很高的灵敏度,肽类和蛋白质的多电荷离子化可由MALDI产生并由TOF采集到多电荷峰,折算而得的分子量测定范围可以高达106u。目前MALDI-TOF已经成为生物大分子分子量测定的有力工具,在生物和生化研究中发挥着重要的作用。已经有大量的文献报道了应用MALDI-TOF在蛋白质分子量测定、一级结构测定、生物多糖和糖化蛋白质研究等诸多方面的工作,形成了一个蓬勃发展的领域。
MALDI-TOFMS在分子量测定的灵敏度、准确性和对复杂体系分析能力方面均比以前的技术有了显著的改善,但仍存在不少问题需要解决。如MALDI-TOFMS的分辨率低,结构信息有限,基质的选择仍是凭经验,对于基质辅助的机理仍不是很清楚。在MALDI应用中,共存物质的干扰也是很明显的。如果样品含有大量的共存物质(混合物)时,制成的结晶不透明或透明度较差,此时质谱信号会很弱或根本没有信号出现。
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