蛋白电泳干货集中营！
本期，我们从蛋白电泳支持中心的“1D蛋白质凝胶电泳”版块中，精选了5个最常见的问题。快看看有没有解开你曾经的疑惑？
关键词
NuPAGE Bis-Tris凝胶 -中性pH体系胶，守护蛋白完整性
NuPAGE Tris-乙酸凝胶 -高分子量蛋白分离利器
Novex Tris-甘氨酸凝胶（WedgeWell楔形孔） -超大上样量
1D蛋白质凝胶电泳的五大常见问题
Q:NuPAGE™凝胶比Novex™ Tris-甘氨酸凝胶具有哪些主要优势？
稳定性更高，保质期更长——NuPAGE™ Bis-Tris凝胶和NuPAGE™ Tris-乙酸凝胶的操作pH（pH 7）低于Novex™ Tris-甘氨酸凝胶（pH 8.1）。在碱性pH下，聚丙烯酰胺水解为聚丙烯酸和氨，而中性pH可减少这种水解的发生。因此，NuPAGE™凝胶比Novex™ Tris-甘氨酸凝胶的稳定性更高，保质期更长。
蛋白质分辨率更高——在碱性pH（8.5-9.0）下，游离的丙烯酰胺可使蛋白质烷基化，其靶点是位于N端和赖氨酸上的氨基和半胱氨酸上的巯基。当pH低于8时，不会发生这种修饰。因此，与Tris-甘氨酸凝胶电泳相比，蛋白质在NuPAGE™凝胶上电泳将更少发生这类意外的化学修饰。
蛋白质水解减少——加热Tris-甘氨酸样品缓冲液（pH 6.8）可使pH大幅降低，导致蛋白质的Asp-Pro断裂。高温和长时间加热/煮沸（100℃下pH降低至4.3）会增加这种断裂的发生率，导致出现多条较弱的带。而NuPAGE™ LDS样品缓冲液（pH 8.5）加热至70℃时，pH降低至8.1，可避免发生这种断裂。
电泳时间更短——NuPAGE™ Bis-Tris凝胶仅需35–50分钟，NuPAGE™ Tris-Acetate凝胶仅需1小时，而Tris甘氨酸凝胶则需90分钟。
Q:NuPAGE™样品缓冲液中使用LDS，而不是SDS？
NuPAGE™ 4X样品缓冲液的pH（pH 8.5）比普通Laemmli样品缓冲液（pH 6.8）高很多，在pH 8.5时，加入4X缓冲液所需浓度的SDS会产生沉淀。此外，LDS（十二烷磺酸锂）更稳定，用于变性同样有效。
Q:为什么我的蛋白质凝胶上有一个样品出现了拖尾或“皱眉”形状？
Q:有些凝胶泳道中的蛋白质条带呈不规则形或波浪形，可能原因是什么？
这可能是由于：
胶孔中有碎片
样品含盐量高（确保盐浓度不超过50–100 mM）
电泳缓冲液存在问题
制胶错误
Q:我在从NuPAGE凝胶上转印大分子量蛋白质时出现问题，能否帮我排除故障？
对于大于100 kDa的蛋白质，建议在安装“三明治”前，将凝胶置于含0.02–0.04% SDS的2X转膜液（无甲醇）中预平衡10分钟，然后使用含甲醇和0.01%SDS的1X转膜液进行转膜。
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