枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备实验
化学法
化学改进法
| 实验方法原理 | 用SPI 培养基和 SPII 培养基结合EGTA进行转化。 |
|---|---|
| 实验材料 | 枯草芽孢杆菌168 |
| 试剂、试剂盒 | SPI 培养基 EGTA SPII 培养基 柠檬酸钠 EGTA 氢氧化钠 KH2PO4 K2HPO4 MgCl2 MgSO4 葡萄糖 酵母膏 ( NH4 )2SO4 |
| 仪器、耗材 | 培养箱 培养皿 锥形瓶 紫外分光光度计 接种环 离心管 |
| 实验步骤 |
一、试剂配制 1. SP 盐
2. CAYE (100x)
3. SPI 培养基
5. SP-A Salts Solution(500 ml)
6. SP-B Salts Solution(500 ml)
7. 100xCAYE Solution(100 ml)
（1）2% Casamino acid ：2 g
8. SPI Medium(20 mL)
10. SPII Medium(6 mL)
11. 100xEGTA Solution
2. 转化前一天晚间挑单菌落至3 ml LB 培养基中，37℃，250 r/min 培养过夜。
3. 第二天上午取160 ul 培养液转接至8 ml SPI 培养基中，37℃，250 r/min 培养至对数生长末期(168 约4-5 h)。
4. 取0.2 ml 生长至对数期末的培养液至2 ml SPII 培养基中，37 ℃，100 r/min 培养90 分钟。
5. 在上述SPII培养基的菌体中加入20 ul 10mmol/L EGTA，再于37℃，100 r/min 培养10 分钟。
6. 将上述处理后的菌液分装成0.5 ml 每管，各加入5 ul DNA(DNA 量不能过高，不超过5 ug)，再于37 ℃，250 r/min 培养90 分钟，取菌液涂布筛选平板。
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| 注意事项 |
1. 注意仪器用品的干净和无菌。
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