感受态细胞的制备及溶液配制
实验试剂
LB培养基，KB培养基，10%甘油，液氮，0.1M CaC12 溶液
实验设备
超净工作台，摇床，离心机，250mL离心瓶，0. 5mL的离心管
实验材料
实验步骤
1) -80℃ 保存的大肠杆菌，农杆菌或者假单胞杆菌在固体平板上(DH5a，BL21在LB平板上，GV3101在LB/Gen; P.s. pv. tomato 0288-9和P. syringae pv. tabaci 6505在KB平板上)划线。
2) 接种单克隆于5-10mL液体培养基，37℃ (大肠杆菌)或者28℃ (农杆菌和假单胞杆菌)培养过夜。
3) 按照1:100-1:500转接到500-1000mL液体培养基，37℃ 培养3-4小时(大肠杆菌)或28℃ 培养8-10小时(农杆菌和假单胞杆菌转化)至细菌达到对数生长期。
4) 将菌液装入250mL离心瓶中，冰上放置30分钟后，4℃ 离心15分钟。
5) 弃上清，加入200mL 10%甘油，于冰上缓慢将菌摇散，4℃ 离心15分钟。
6) 重复前一步骤2-3次，最后弃上清，加入少量10%甘油重悬细菌。
7) 分装于0. 5mL的离心管中，每管40ul，液氮速冻，-80℃ 存放。
1) 挑取E.coli BL21单克隆接种到5mL LB培养液中，37℃ 振荡培养过夜。
2) 按照1:100-1:500转接到500-1000mL液体培养基，37℃ 培养3-4小时至细菌达到对数生长期。
3) 将菌液装入250mL离心瓶中，冰上放置30分钟后，4℃ 离心15分钟。
4) 弃上清，加20mL预冷的0.1M CaC12 溶液轻轻悬浮菌体，冰上放置15-30分钟后于4℃ 离心5分钟。
5) 弃上清，加2mL冰预冷的0.1M CaC12 溶液，重悬菌体。
6) 分装于0. 5mL的离心管中，每管40ul，液氮速冻，-80℃ 存放。
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项目成果
