醋酸纤维素膜电泳分离鉴定蛋白质实验
电泳法
实验方法原理 | 混合蛋白质样品中各种蛋白质的等电点不同, 在pH8 . 6 的巴比妥缓冲液中, 各种蛋白质所带的静电荷量不同, 加上蛋白质分子大小不相同, 在电场中移动的速度也不等, 例如, 血清或卵清样品中白蛋白等电点比其他蛋白质低, 在pH8 . 6 时带的负电荷比其他蛋白质多, 加上白蛋白的分子较小, 因此在电场中比其他蛋白质移动速度快。这样, 样品中的蛋白质在醋酸纤维素膜上就可以形成区带, 可以分离和分析蛋白质组成等。另外, 作为纯化了的蛋白质电泳后的区带应是一种, 否则就没有纯化好。醋酸纤维素膜是对纤维素的羟基进行乙酰化而得的, 将其溶于有机溶剂( 丙酮、氯仿、氯乙烯、醋酸乙脂等) 后抹成一均匀薄膜, 则成醋酸纤维素膜, 它有强渗透性, 对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白质电泳具有简便快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。蛋白质与氨基黑10B 特异结合而不与醋酸纤维素膜结合,染色一段时间后脱色, 膜上没有结合蛋白质的部位就不呈色, 有蛋白质的部位就颜色明显。 |
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实验材料 | 血清蛋白质 蛋白质样品 |
试剂、试剂盒 | 巴比妥 蒸馏水 HCl 氨基黑 磺基水杨酸 冰醋酸 醋酸 无水乙醇 |
仪器、耗材 | 电泳仪 电泳槽 培养皿 血色素吸管 铅笔 尺 玻片 滤纸 镊子 |
实验步骤 |
1. 膜的准备: 将醋酸纤维素膜切成8 cm×2 cm 条块( 或根据需要决定薄膜大小) , 在薄膜一端1 . 5 cm 处用铅笔轻轻画一条线( 点样处) , 浸入巴比妥缓冲液中至完全浸湿( 大概20 min 左右)。用镊子取出浸透的薄膜, 夹在两层滤纸中间, 轻轻按压,吸去多余的液体。
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