4.1 mRNA 在网织红细胞裂解液中的翻译
从哺乳动物细胞中提取的 mRNA 或通过克隆化 DNA 在体外转录产生的 mRNA 在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质,这些蛋白质可用于免疫沉淀试验或进行生物学活性测定。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | 乙酰苯肼溶液 A溶液 B灭菌重蒸水CaCl2EGTA氯高铁血红素储存液亚精胺磷酸肌酸氨基酸DTTHEPES水KCl乙酸镁[35S] 甲硫氨酸. |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、材料与设备 |
注意事项 | 1) 网织红细胞裂解液的翻译活件取决于所加入的外源 mRNA。小球菌核酸酶在钙离子存在时有活性,加入 EGTA 后其消化活性丧失。因此,要确保网织红细胞裂解液中内源 mRNA 消化完全,以免翻译时产生杂带从而影响结果。 |
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