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逆转录病毒介导的基因技术

2023.3.08

是目前将外源基因导入细胞的最有效的方法。此系统包括重组逆转录病毒载体和包装细胞两个部分,广泛应用的逆病毒载体LNL6是以Moloney鼠白血病病毒(MO-MLV)改建的。该病毒为RNA病毒,感染细胞后,其基因组RNA经逆转产生双链DNA拷贝插入宿主染色体形成前病毒,前病毒转录产生正链即为病毒基因组RNA。

整个基因组从5′端到3′端依次是:5′长末端重复顺序(LTR)编码病毒内部结构蛋白的gag基因,编码蛋白的pol基因,编码外壳蛋白的env基因以及3′LTR和一个介子5′LTR和gag基因之间的包装信号。将病毒蛋白编码区gag、pol、env全部切除,代之以外源性目的基因即改建为病毒载体,保留了LTR和包装信号,是一种复制缺陷性病毒。同时,设计一种包装细胞系,其内含有辅助病毒基因组,即为包装信号缺乏的MO-MLV。当逆转录病毒载体进入包装细胞系时,载体基因就被包装形成完整的病毒颗粒,于是包装细胞系就成了制造病毒载体的生产细胞系。

将靶细胞与生产细胞系其同培养或是收集含有载体病毒的生产细胞系上清液与靶细胞一起孵育,即可有效地进行基因转移。逆转录病毒载体技术的优点在于转染谱广,可感染包括人体在内的多种动物细胞类型,一次可感染大量细胞,转染率高达100%,转染的基因可为单拷贝和少数拷贝,能准确地整合到宿主细胞基因组中,整合率高,且能长期有效地表达。


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