从脐血来源多能祖细胞(CB-MNCs)分离培养CD34+细胞实验3
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | (a)将脐带血来源的间充质干细胞(blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSCs)作为饲养层细胞,用MSCs培养基重悬CB-MSCs,细胞浓度为5×104个细胞/mL。 (b)将CB-MSCs接种到6孔板 (C)每周两次半量更换新鲜培养基。 (d)当CB-MSCs达到以上汇合时,用10μg/mL丝裂霉素c处理,37℃ 2.5 h„ (e)用无血清IMDM将CB-MSCs洗两遍。 (f)按1×104个/mL CD34+细胞重悬于含细胞因子的共同培养基(100 ng/mL干细胞因子,100ng/mL IL-6,50 ng/mLFlt-3配体,10 ng/mL促血小板生成素)。 (g)将CD34+细胞接种到CB-MSCs饲养层细胞上。 (h)每周两次更换1/4培养基。 (i)2周后,收集未贴壁细胞。 展开 |
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