绿色叶片植物叶线粒体RNA的分离
实验方法原理 | 利用差速离心,将线粒体从其他亚细胞结构中分离出来,再用蔗糖梯度离心进一步纯化得到线粒体。用核糖核酸酶 A 处理从中去除叶绿体 RNA,然后加入高浓度硫氰酸胍灭活核糖核酸酶 A,硫氰酸胍作为一种蛋白变性剂可非常有效的灭活核糖核酸酶 A。通过 CsCl 梯度离心,线粒体 RNA 沉淀下来。最后用 LiCl 沉淀法,将 CsCl 梯度离心中共沉淀下来的单链 DNA 是从线粒体 RNA 中除去。 |
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试剂、试剂盒 | 5.7moI LCsCl 溶液 10 mmol LEDTA pH7.5 DEPC 水 变性缓冲液 EB 抽提缓冲液 4mol L 硫氰酸胍 7.5mol L 盐酸胍 2mol L 和 4mcL LLiCl 上样缓冲液 10XMOPS 缓冲液 2mol L 乙酸钾 2mol L 乙酸钠 5% 十二烷基肌氨酸钠 TE 缓冲液 洗脱缓冲液 |
仪器、耗材 | 匀浆器 |
实验步骤 |
一 材料与设备 展开 |
注意事项 |
1) 操作过程中戴塑料或乳胶手套,所有试剂仅用于 KNA 提取,避免核糖核酸酶的污染。所有的玻璃器皿在 160℃ 处理 4 h。所用的塑料器皿用硫氰酸胍处理后,浸于 0.2%DEPC 水中 12 h, 高压消毒。 展开 |
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项目成果
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焦点事件
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科技前沿
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技术原理
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产品技术
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