暗视场显微镜的原理及注意事项
暗视场显微镜：使用特殊的暗视场聚光镜使照明光线偏移而不进入物镜，只有样品的散射光进入物镜。
注意事项
1、制作暗视场光挡时，若光挡直径过小或光挡的中心位置不正，则不能全部挡掉直射光，视野不暗，样品与背景的明暗反差不明显;若光挡直径过大，聚焦到样品上的光线不足，使暗视野显微镜观察到的样品亮度不佳，影响观察效果。
2、使用暗视野显微镜时，照明光源的照明强度要高，否则样品的反射光强度不够，影响观察效果。
3、若视场中样品与背景明暗反差不强时，可以上下调节聚光器的位置，使视场内的反差提高。
4、要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必须清洁无尘。载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上;使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。
5、载玻片的厚度要适宜，照明光束经暗视野显微镜聚光器后，产生空心照明光锥，即中心为暗区。而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上，很短的距离。因此，载玻片的适宜厚度为0.8～1.2mm。
6、物镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径，否则会因物镜的孔径角大于暗视野显微镜聚光器所形成的照明光束中心暗区的角度，致使部分照明光线射入物镜，破坏或降低了暗视场的照明。
7、暗视野显微镜镜检时室内要暗，如果没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻止目镜周围的光线射入。
8、在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会妨碍暗视野显微镜镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
工作原理
暗视场显微镜在构造上应用丁达尔现象（Tyndall phenomenon:当聚光光束射入溶胶时，从光束的侧面可以看到一条发亮的光柱，在光的传播过程中，光线照射到粒子时，如粒子直径略小于入射光波长，则发生光的散射，每个微粒就成为一个发光点，从侧面可以看到一条光柱。），装配了一类特殊聚光器——暗视场聚光器，使入射光束，从聚光器斜向照明被检样品。由于照明光线与显微镜光轴形成较大的角度通过物场，或因聚光器的特殊构造，照明光线在聚光器顶透镜或盖片的上表面发生全反射，致使照明光线不能入射物镜之内。但是，样品被照明并发出反射光。镜检时，因不能直接观察到照明光线，与光轴垂直的平面视场暗黑，在深暗的背景上能清晰地看到由散射光和反射光形成的明亮的物体影像，物像与背景造成很大的反差。视场内的样品，被斜射光线照明，可从样品各种结构表面散射和反射光线，看到许多细胞器的明亮轮廓，诸如细胞核、线粒体、液泡以及某些内含物等。如果是正在分裂的细胞，其各类纺锤丝和染色体亦可窥见。
暗视场显微镜是利用样品的散射光和反射光进行观察，所以只能看到物体的存在与运动而不能辨清其微细结构。暗视场显微镜的检测能力，取决于入射光的强度和视场的反差，后者又随微粒及其背景的折射率差别的加大而增加。
暗视场显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视场显微镜为暗视场照明更为贴切。暗视场照明是斜向照明的一种，这种照明法能提高对微小物体的分辨能力，对大小在0.004μm以上的微小粒子，尽管看不清楚其结构，亦可清晰地分辨其存在和运动。
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焦点事件
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技术原理
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