胶体金在免疫层析快速检测技术中的应用
免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带,当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色,从而实现特异性的免疫检测。早孕诊断用的免疫层析试纸条(通常又叫尿妊纸条)是一个成功的例子,该法检测速度快,一般1～2min可出结果;灵敏度较高,可达50IU/L;结果准确可靠,在尿妊诊断中得到广泛应用。以其为例,装配方法见图1:在塑料底板上分别将吸尿用玻璃纤维、冻干金标记抗α-HCG玻璃纤维、已固定有抗β-HCG抗体的NC膜及硬质吸水滤纸按图装配,配件与塑料底板的结合可用双面胶或其他黏性材料粘接。装配好的纸板按纵向剪切,裁成宽度为4mm的条状,即为尿妊用纸条。尿妊试纸条的快速特性来源于胶体金免疫层析法的固有特性,与原材料选择特别是NC膜的孔径大小密切相关,准确性取决于β-HCG的特异性。
胶体金试纸条用于肉眼水平的免疫检测中,具有以下优点:
样品不需要特殊处理,试剂和样本用量极小,样本量可低至1～2μL;
敏感性和特异性高,既可用于抗原检测,也可用于抗体检测;时间大大缩短,提高了检测速度;
操作简单,不需荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器,更适于现场应用;实验结果可以长期保存。
这使其在检验检疫上有很大的应用潜力,可以通过制备单克隆抗体或基因工程抗体,将检疫条约规定的疾病的抗体做成试纸条,直接检测血液、拭子、粪便、组织悬液中的病原体,对于旅客、伴侣动物等不便于长期隔离的个体的出入境检疫在现场就可以完成,检疫结果还能备案。
目前在动物疾病诊断中已经使用了细小病毒检测试纸条,如果再将其他传染病的抗体制备成试纸条,技术上是成熟的,方法上是可行的,随着研究工作的开展,胶体金试纸条广泛用于检验检疫是必然的发展趋势。
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