苏木精－伊红及过碘酸雪夫氏的染色方法
实验概要
掌握苏木精－伊红(hematoxylin and eosin, HE)及过碘酸雪夫氏染色(periodic acid-schiff stain，PAS染色)方法。
实验原理
过碘酸雪夫氏染色：过碘酸是一种氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1.2乙二醇基使之变为二醛，醛与Schiff氏试剂结合，形成红色的取代色素而得到定位。PAS染色可显示糖原、中性黏液物质、基底膜、软骨、垂体、霉菌及寄生虫等物质。是广泛应用的染色方法。在肾小球肾炎时PAS染色可显示基底膜和系膜区的改变。
实验步骤
1. 苏木精－伊红染色
1) 脱蜡：主要用二甲苯脱蜡。
2) 梯度乙醇水化。
3) 自来水冲洗。
4) 苏木精染色：水化后的切片放入苏木精染液中浸5~20min，染细胞核。自来水冲洗3~5min。
5) 1％盐酸乙醇分化5~30s。自来水冲洗1~3min。
6) 弱碱性水溶液返蓝30s~1min。自来水充分冲洗5~10分钟。
7) 伊红染色：充分水化后的切片直接入伊红染色液中，染细胞质5~15min左右。
8) 梯度乙醇脱水。
9) 二甲苯透明。
10) 中性树胶封片。
2. 过碘酸雪夫氏染色
1) 切片按常规脱蜡水洗，再用蒸馏水洗涤。
2) 0.5%~1％过碘酸水溶液氧化5~10min。
3) 蒸馏水充分洗涤，至少3次。
4) Schiff氏试剂染10~30min。
5) 倾去染液后，直接用亚硫酸冲洗液处理切片3次，每次2 min，以达到分化。
6) 自来水冲洗5~10 min，使之显现出红色。然后蒸馏水洗1次。
7) 明矾苏木精染核，自来水充分洗涤。
8) 95%乙醇及无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果判定：PAS阳性物质呈鲜紫红色，其它组织淡粉红色，细胞核呈浅蓝色。
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