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尿蛋白定性测定(干法学法)

2019.5.07

1. 实验原理

利用指示剂的蛋白质误差原理,蛋白质与指示剂的离子(溴甲酚蓝,四溴酚蓝二酯)相结合生成复合物,引起指示剂的进一步电离,超过了尿液的缓冲能力,指示剂则发生颜色变化。颜色的深浅与蛋白质含量成正比。

2. 标本采集

2.1 标本采集前病人准备:以清晨第一次尿为宜,急诊患者可随时留取。

2.2 标本种类:新鲜尿液

2.3 标本要求:采集患者尿液标本时,盛尿液的容器必须清洁干燥,要求留取中段尿。

3. 标本储存:从排出到检测应在2小时内完成。如不能及时送检或分析,应置4℃下冷藏保存,但冷藏时间不得超过6小时。

4. 标本运输:室温运输。

5. 标本拒收标准:细菌,经血,白带,精液,粪便污染标本不能作测定。

6. 试剂

6.1 试剂名称 Combur10 TestR M

6.2 试剂厂家 德国 Roche 诊断试剂公司

6.3 包装规格:100Test/kit

6.4 试剂盒组成:试纸条:100

6.5 试剂储存条件及有效期:试剂盒贮存于2-30条件下,可使用至试剂盒所标示有效期。

7. 仪器设备

7.1 仪器名称:罗氏尿液分析仪

7.2 仪器厂家:Roche

7.3 仪器型号:MiditronR Junior II

7.4 仪器校准程序:在使用过程中,一般是两周校准一次,如超过此期限,仪器会提示“Please Calibrate”(请校准)。通过测定内部参比块,环境温度和光学系统的改变都可被补偿。当条件改变很大时,比如参比块腐蚀或发光二极管的亮度变暗,仪器将打印出一个错误信息;校准条是有稳定特征的灰白色试条,这些校准条只能使用一次。校准前,应先清洁试纸托盘与运输臂。步骤为:在“

READY<START>”显示时,按<Calibrate>键,放上校准条。再按<Calibrate>键,校准条被送入机器内,屏幕显示“Calibrating”(正在校准),约一分钟后,标准结果将被打印出。“Calibrating O.K”,表示校准成功。

8. 操作步骤:

8.1 <START>键,显示“Prepare Strip”,此时试条筒中拿出试条。

8.2 4秒钟后,显示“Dip Strip 1”,同时绿灯闪烁,将试条浸入尿样中。

8.3 当显示“Insert Strip 1”,把试条放在试条托盘上,此时绿灯亮,若要人工输入颜色,按<Color>键,再按<Set>键,选择相近的颜色,最后按<Enter>键确认,同样也可人工输入浊度。

8.4 20秒后,显示“Dip Strip 2,然后重复以上过程。

每一个测量完成后将自动打印出结果。

9. 结果判断:淡黄色(-),淡黄绿色(+/-),黄绿色(+),绿色(++),灰绿色(+++),灰兰色(++++

10. 质量控制:质控液的使用,低浓度质控液(蛋白质

1.5g/L)蛋白定性应为(++);高浓度质控液(10g/L)蛋白定性为(++++)。

11. 参考范围:阴性

12. 临床意义分为功能性,体位性,病理性蛋白尿,后者见于肾炎,肾病综合症。

13. 操作性能:快速简便,特异性强,灵敏度高,重复性好。

14. 方法局限性

14.1 试带应干燥,避光保存,远离酸性和碱性物质。避免用(湿)手触摸试带的试剂垫部分,以防试带污染失效。

14.2 浑浊尿不影响比色,但尿液颜色异常(如血尿,血红蛋白尿,胆红素尿)将影响结果的观察。

15. 注意事项

15.1 干扰因素的控制与分析

15.1.1 PH:尿液偏碱时(PH>9),干化学试带法可呈假阳性;尿液偏酸(PH<3)则会引起蛋白假阴性。因此,实验前需先将尿液PH调至5—6

15.1.2 药物:当患者应用大剂量青霉素钾盐,庆大霉素,磺胺,PAS,含碘照影剂时,可使化学试带法呈假阴性。

15.1.3 反应时间和标本量:试带法需要足够的反应时间和标本量,因此检测时要求试带充分浸湿,但不宜长时间浸泡。时间过短,标本不足,反应不完全使结果偏低;时间太长使试带上包埋的药物洗脱至尿中,也会导致结果偏低。

15.2 试带的差异  同厂家不同批号的试带显色有差异,故强调使用严格标准化的试带。

16. 当检验系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:当检验系统(仪器)不能工作时,可联系仪器厂家,进行紧急修理,如一时

不能修好,如别的实验室有同类仪器可到别的仪器上先测,如别的实验室无同类仪器,申请厂家送一台能正常工作的仪器代替。


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