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荧光密螺旋体抗体吸收试验的操作步骤

2023.2.14

(1)抗原片制备:Nichols株梅毒螺旋体(每高倍视野20条)抗原悬液,在玻片上涂数个直径为5mm的菌膜,干后以甲醇固定。

(2)待检血清预处理:待检血清先经56%30分钟灭活,取50ul血清与200ul吸附剂(Reiter株非致病密螺旋体)混匀,37℃作用30分钟,以充分吸除非特异性抗体。

(2)夹心法荧光显色:吸附后的待检血清用磷酸盐缓冲液(PBS)作1;20—1:320的倍比稀释,将稀释后的血清分别滴加于抗原菌膜上,置湿盒内37℃孵育30分钟,然后用PBS洗片,并将玻片在PBS中浸洗,换液3次,每次5分钟,吹干。各抗原反应片上滴加工作浓度荧光素标记的羊抗人lgG抗体,置湿盒37℃孵育30分钟,再用PBS按前法洗片,干后用甘油缓冲液封片。

(3)荧光显微镜观察:每次实验设阳性、阴性、非特异性血清对照。阴性标准血清无荧光菌体或偶尔见荧光菌体出现:阳性对照可见多数(高倍视野15条)荧光菌体出现。并以此为参照作出待检标本的判定。


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