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食用油中胆固醇含量测定凝胶色谱净化-高效液相色谱法

2019.10.30

胆固醇是动物性食物中常见的成分，而人类过多食用胆固醇则会引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病以及风湿性关节炎、癌症、糖尿病和帕金森等相关疾病。需要控制饮食中胆固醇的摄入，因此建立一种准确而行之有效的胆固醇含量的测定方法是十分必要的，目前，胆固醇的定量分析方法主要包括：比色法、薄层层析法、气相色谱法、高效液相色谱法及酶法，皂化法等。但这些方法都存在着操作繁杂、误差大、重现性差等问题。

本文采用全自动凝胶色谱仪，以胆固醇为检测目标，对样品进行分离净化，采用 HPLC进行测定，建立了一个简便、快捷、实用的测定食用油中胆固醇的分析方法。

仪器与试剂：

八通道自动凝胶渗透色谱仪Surwit Eight GPC
LC-10Tvp二元高压梯度高效液相色谱系统
旋转蒸发仪
胆固醇（99.7%）
甲醇（HPLC），乙酸乙酯、环己烷和石油醚。
实验用水均为超纯水。

标样和样品处理

标准溶液配制：

精密称取胆固醇标样 0.500 g 置于 50 mL 容量瓶中，用乙醇溶解并定容，配成 10.0 mg/mL 的胆固醇储备液。更低浓度的混合标准溶液用乙醇溶液逐级稀释。所有标准溶液均置于冰箱中 4℃保存备用。
样品提取方法分别取 0.5g 食用油于 2 个样品瓶中，一个用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂定容至 5ml 作为样品空白试剂，另一个加入 3 mL 标准溶液后再用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂溶解样品，用于后续的凝胶净化。

凝胶渗透净化

凝胶渗透色谱柱
流动相：等体积的乙酸乙酯和环己烷混合溶液，流量：5 mL/min；
紫外检测波长254nm；
收集8～16min馏分于60mL试剂瓶中，然后在40℃，150 rpm条件下旋转蒸发至干，加入5 mL乙醇溶解，供HPLC检测。

分析条件

色谱柱： C18 (250mm × 4.6mm)；
流动相为 100%的乙醇；流速 1.0 mL/min；
进样量 20 µL；
紫外检测波长 208nm。

概述：

Surwit 八通道自动凝胶渗透色谱仪GPC，采用定制化模块设计，可以自动化完成样品进样、分离净化、目标组分收集的操作，最多一次可完成8个样品同时处理。体积小巧，操作方便。广泛适用于净化食品、粮油谷物、水、土壤、沉淀物等环境中的农药兽药残留、OCP、PAHs、PCBs分析，中药、生物组织等各类复杂样品前处理，完全符合国内相关标准方法和药典方法要求。

特点：