免疫酶染色法
实验概要
免疫酶染色法亦称免疫酶标组织化学法。标本制备后，首先将其内源酶抑制，接着即可进行免疫酶染色检查。常规的免疫酶染色法可分为直接法和间接法两种。前者固定标本中的抗原直接与酶标抗体结合，达到酶染色目的；后者是抗原先与其抗体(第一抗体)结合后，再与酶标抗体(第二抗体)结合，而进行酶染色的。免疫酶染色法的酶底物产物为不溶性物质，可沉着于抗原上，使其显色。间接法虽然多一步骤，但使用范围广。此外，酶标记第二抗体可用酶标记SPA或生物素与亲和素系统等代替。
主要试剂
1. 去除内源性酶试剂：1%H2O2甲醇溶液。
2. 空肠弯曲菌免疫血清(第一抗体)：CjC37(鸡源)和CjP5(猪源)抗血清，自制。
3. 驴抗兔IgHRP(第二抗体)：自制。
4. 稀释液与洗液(pH7.4 PBS)。
5. 底物溶液(DABH2O2)：
1) TrisHCl缓冲液(pH7.6，0.05mol/L)。
2) 底物溶液，3,3-二氨基联苯胺50mg、TrisHCl缓冲液100ml、过滤，4℃冰箱保存。用前加H2O2，最终浓度为0.3%。
实验材料
空肠弯曲菌
实验步骤
1. 标本制备：将疑似空肠弯曲菌病料或其培养物涂片，干燥，然后置除去内源性酶试剂中处理及固定10min。
2. 冲洗：用PBS冲洗1次，沥干。
3. 加抗血清：用稀释液对CjC37或CjP5抗血清(针对同源菌)作1∶160稀释，滴加在玻片上，置37℃于湿盒内孵育30min。
4. 洗涤：3次。
5. 加酶标记抗体：用稀释液对驴抗兔IgGHRP作1∶500稀释，滴加于玻片上，置37℃于湿盒内孵育30min。
6. 洗涤：3次。
7. 滴加底物溶液：室温作用20min，用自来水冲洗，终止反应，干燥，光学显微镜检查。
注意事项
1. 涂片后，为了防止玻片上的标本面反置和号码混乱，应用一小片橡皮膏贴于玻片一端，并用铅笔编号。
2. 滴加酶染色试剂时，玻片应沥干，并且各试剂滴加的量不宜过多，以防溢出。
3. 孵育时，温箱内需放一水槽或将玻片置湿盒内孵育，防止酶染色试剂蒸发或干燥。
