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ELISA试剂盒检测重组蛋白的研发

2019.12.11

ELISA试剂盒采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。

ELISA试剂盒置4℃前提保留12个月,试剂盒不乱性无显著改变。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可知足诊断抗原质量要求。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病尺度阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。

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