蛋白质水解的工作流程
蛋白质水解的工作流程包括:
1.制备裂解液;
2. 溶液内或凝胶内进行酶切;
3. 使用离液剂(如尿素和胍)使蛋白质变性;
4. 使用DTT还原二硫键;
5. 使用碘乙酸或碘乙酰胺将半胱氨酸烷基化;
6. 去除试剂和交换缓冲液;
7. 在适当的pH和温度下,用胰蛋白酶或其他蛋白酶在碳酸氢铵缓冲液中过夜变性约18小时;
8. 加入酸类物质终止酶切。
9. 蛋白质富集/清洗。
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