荧光原位杂交的背景
对于利用rRNA的荧光原位杂交来说,如下原因可导致较低的荧光信号强度:
较低的细胞核糖体含量
较低的细胞周边的通透性
较低的目标序列可接触性(由于rRNA的折叠产生的构象,有些位置与rRNA分子内其他链或其他rRNA或蛋白紧密接触,从而使探针无法和目标序列杂交)
为检验细胞中的目标序列是否容易被探针杂交,及测试最佳杂交温度,可利用“克隆荧光原位杂交”(clone-FISH)进行试验:将rRNA基因结合入质粒,转化至大肠杆菌中表达,构成核糖体,再用荧光标记的探针杂交。
FISH可与流式细胞术联用,对特定荧光标记的细胞进行计数或者分离。
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