Postnova场流分离系统:蛋白质聚集体分离解决方案

2010-10-29 20:53 来源: 德祥
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Postnova场流分离系统应用举例——蛋白质聚集体分离的理想解决方案

 

     蛋白质聚集体已经成为药学发展和质检上一个重要的问题。其活性,生物利用度和可能的消极免疫响应等性能直接与不同程度的聚集态的存在有关。因此不仅FDA, 更多的官方和私人研究机构都对聚集态结构产生越来越大的兴趣。他们研究的目标是确定精确的聚集情况,即药物中的蛋白质中某个时间有多少聚集态结构形成以及如何避免这种情况。


场流分离技术是分离技术的一种,它可以与液相色谱(LC)相比。就像液相主要用来分离小分子一样,场流分离主要用来分离大分子或粒子(可称为:粒子色谱)。场流分离技术是一个独特的分离技术,所有场流分离技术都使用相同的基本分离的原则,但采用不同的分离场。根据不同分离场,场流分离技术可分为流动场流分离,沉淀场流分离,热场流分离等。

当样品注射到场流分离通道时,分离应力作用于聚合物或粒子强迫它们向通道底层移动,通道底层就被称为聚集壁。样品不能透过聚集壁,所以它们再次扩散到通道中心。扩散应力被分离应力抵消,在很短的时间(一般是30~120秒)内两种力之间就建立起一个稳定的动态平衡。大小不同的颗粒有着不同的扩散系数,所以它们在通道内由于速度梯度而被分离。注射后的粒子/聚合物由于“垂直场力”的存在,受迫向垂直于流动相流动的方向移动。小粒子由于具有较大的扩散系数将会比大粒子在通道内扩散的更深远。结果就是,小粒子在通道内被“层流”更快的定位,并因此而被洗脱出来;而大粒子则定位较慢,后洗脱出来。

上图是使用AF4非对称场流分离单克隆抗体的结果。在20分钟内,不同程度的聚集态被分开,整个分离过程由于没有固定相存在,因此蛋白质的空间结构不会被破坏。样品不需要前处理,更可以通过联用多种在线检测器(LS, UV, RI, SEM, DLS),方便迅速得到需要的数据。
 
        具有以下优点:
  • 快速、温和的分离,可以兼容任何溶剂和缓冲液
  • 超高的分辨率(±1nm)
  • 没有任何固定相的分离通道
  • 宽分离范围:粒径1nm~100mm /分子量1000Da~1012Da
  • 无需前处理及过滤,直接进样复杂基质样品
  • 可收集所需要的样品,方便升级至制备级
  • 能够连接各种检测器,如在线串联紫外、光散射、荧光、质谱等检测器
  • 可同时测定分子的分子量及粒子的粒径。

        这些优点使在蛋白质及其聚集体分离方面可以发挥巨大的作用。

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