蛋白质分离实验_分离未知 pI 蛋白质
用 CE 进行 IEF分离是选择随后用于在非衍生毛细管柱上分离蛋白的缓冲液系统的有效的第一步。如果没有检测到蛋白质，可能是被吸收到柱的硅表面。在离子去垢剂如 SDS 存在的情况下重复分离过程，这样就会用负电荷包被蛋白质从而阻止吸收。但是，这意味着蛋白质只能依据大小的不同而进行分离。
知道蛋白质的 pI 可以选择适宜的运行缓冲液使其荷质比的差异最大化。如果不知道蛋白质的 pI，可以用包被的毛细管柱在高 pH、高离子强度的缓冲液下达到分离的效果。
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 用 50 mmol/L 硼酸钠缓冲液 1/10（V/V） 稀释蛋白质样品，使终浓度 1.0 mg/ml，也可在 50 mmol/L 硼酸钠缓冲液中透析样品（在 1 mg/ml 的浓度下）。 2. 用 500 mmol/L 硼酸钠缓冲液充满包被的柱子。 3. 流体动力学地注射样品，如 1 lb/in2 的压力 3 s。 4. 用以下条件进行分离： 探测波长：200 nm 温度：25℃ 运行电压：10 kV 运行时间：30 min 展开 |
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