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实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸作业指导书

2020.7.01

实时荧光 RT-PCR 方法检测新型冠状病毒核酸  

（一）目的。

规范实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保证实验结果的正确可靠。

（二）范围。 copyright sysqy.com

适用于实时荧光RT-PCR方法检测新型冠状病毒核酸。

（三）职责。 内容来自实验室前沿网站

检测人员：负责按照本检测细则对被检样本进行检测。 sysqy.com

复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。

部门负责人：负责对科室综合管理和检测报告的审核。

（四）样本接收和准备。

核对被检样本姓名、性别、年龄、编号及检测项目等；

待检样本的状态如有异常，需注明；

待检样本应存放于-70℃冰箱保存。

（五）检测项目。

1.新型冠状病毒核酸测定（实时荧光RT-PCR方法） 推荐选用针对新型冠状病毒的ORF1ab、N基因区域的引物和探针。

靶标一（ORF1ab）: copyright sysqy.com

正向引物（F）：

CCCTGTGGGTTTTACACTTAA 反向引物（R）：

ACGATTGTGCATCAGCTGA

荧光探针（P）：

5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'

靶标二（N）:

正向引物（F）：

GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT 反向引物（R）： 内容来自实验室前沿网站

CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG

荧光探针（P）：

5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'

核酸提取和实时荧光RT-PCR反应体系及反应条件参考相关厂家试剂盒说明。

2.结果判断 阴性:无Ct值或Ct≥40。

阳性：Ct值<37，可报告为阳性。

灰度区：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct

值<40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性,否则为阴性。 内容来自实验室前沿网站

注：如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。


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