半制备规模单链RNA纯化（二）
图2中所示被选中的馏份收集窗表示不同的质量负荷。峰值采集后，样品可以根据需要对等分和干燥，以便长期储存。TEAA的挥发性使离子对缓冲组分的去除非常容易。溶剂蒸发后被纯化的寡核苷酸实际上是不含盐的。
UPLC条件
纯化RNA寡核苷酸的纯度通过ACQUITY UPLC系统来验证。如图3所示，我们的纯化方法有效地减少了失败序列杂质，所产生的寡核苷酸的纯度比市面上可以买到的未经纯化的寡核苷酸高出许多。
液相色谱系统： 沃特世 ACQUITY UPLC系统
色谱柱： ACQUITY UPLC OST C18柱，
2.1 x 50mm，1.7 μm
柱温： 60 ˚C
流速： 0.2 mL/min
流动相A： 0.1M TEAA，pH 7.5
流动相B： 80:20 0.1MTEAA/ACN
梯度： 35 – 85% B洗脱10.0分钟
(1%ACN／分钟）
检测： PDA，260 nm
结论
本文介绍的单链RNA寡核苷酸的纯化策略速度快，成本低，可生成高纯度材料。使用OST色谱柱化学技术和Alliance HPLC系统，大量的单链RNA粗产物可以在短时间内成功纯化，进而得到高纯度（约95%）的材料；根据所收集峰面积与样品总峰面积的比值进行估计，产率可达55%。
该方法对用于RNAi实验（这类实验中保证纯度和目标的特异性至关重要）的单链RNA的纯化极为有用。此外，由于T EAA的可挥发性，该策略可以将纯化的寡核苷酸储存，在没有T EAA这种不必要的盐的环境中，也可以避免其他纯化手段中产生的不必要的杂质。总的来说，该策略提出了一个比目前可用方法更优越的全面纯化方法。此外，在考虑样品纯化所需的时间成本、反应剂和沃特世XBridge OST色谱的寿命时，这种纯化方法非常经济。
参考文献
[1] 寡核苷酸的UPLC分离：方法开发。沃特世应用说明书。2007: 720002383EN。
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