胃蛋白酶的含量测定方法
照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定盐酸溶液取1mol/L盐酸溶液65ml,加水至100ml供试品溶液取本品适量,精密称定,加盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2~0.4单位的溶液。对照品溶液取酪氨酸对照品适量,精密称定,加盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液。测定法取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1ml,另3支各精密加入供试品溶液1ml,置37℃±0.5℃水浴中,保温5分钟,精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml,摇匀,并准确计时,在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟,立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,摇匀,滤过,取续滤液备用。另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5ml,置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟,再精密加入5%三氯醋酸溶液5m,其中1支加供试品溶液1ml,另1支加盐酸溶液1ml,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品与对照品的空白对照,在275nm的波长处测定吸光度,算出平均值As和A,按下式计算。A×Ws×n每1g含胃蛋白酶的量(单位)=As×W×10×181.19式中As为对照品的平均吸光度A为供试品的平均吸光度;Ws为每1m1对照品溶液中含酪氨酸的量,HgW为供试品取样量,g;n为供试品稀释倍数在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1mol酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力的单位。
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