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初筛实验室抗-HIV临界值质控血清的制备及应用

2019.8.06

王锦恒邓梅英 541001 桂林医学院附院

关键词抗-HIV 质量控制临界值质控血清

ELISA 是目前公认的抗-HIV 较佳的筛选方法[1]，但在实际工作中，笔者发现ELISA抗-HIV的检测受诸多因素影响，有系统误差（包括试剂盒质量问题、移液器标定与否、酶标仪读数的准确性、冰箱水浴箱温度的波动及环境温度等）和随机误差（由于工作人员操作不规范造成，如加样不准甚至漏加或误加等），导致检测结果出现较大偏差。在日常抗-HIV检测过程中设立空白、阴阳性对照且通过阴阳性对照值计算出临界值（Cutoff）,被检标本超出该值即为阳性。因此，在实验中加入一个质控物（临界值质控血清）对实验进行动态质控，建立较为完善的质量控制|检验地带网|体系是非常必要的，鉴于目前市售定值临界血清较为昂贵，而用阳性血清灭活作为定值血清存在着潛在危险，HIV初筛实验室如何获得价廉安全的质控血清，笔者采用阳性对照血清自制临界血清，在实践中取得了较为满意的效果。

1. 材料与方法

1.1 材料（1）试剂抗-HIV ELISA试剂盒，抗-HIV阳性血清由新创（厦门）科技有限公司提供，批号：20050361 （2）仪器美国宝特Bio-Tek ELX800型全自动酶标仪,ELX50全自动洗板机,电热三用水箱。

1.2 方法收集大量ELISA试剂盒中抗-HIV阳性对照，将之混合然后按1：1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 稀倍比稀释，并测定OD值，以超过试剂盒临界值（Cutoff）约一倍的稀释度（1：16）作为稀释浓度对阳性对照品进行稀释。将稀释好的血清进行分装，每支200微升，注明名称批号置于 -20℃ 冰箱保存，没天检测样品前取一小融化后充分混匀。严格按试剂盒说明书操作，取连续20天，得到20个OD值和Cut off值计算S/CO值的平均值(X)标准差（S）及变异系数（CV），对数据进行异常值检验，如果发现异常值，将此数据剔除，再重新计算余下数据的均值和标准差。

2. 结果

2.1 计算20个测定值S/CO值的相关值：X = 1.91, S= 0.155, CV=8.1％

2.2 绘制质控图[2]：用Levey-Jennings 质量控制方法，绘制质控图。以 S/CO值为纵坐标，以次数或日期为横坐标，建立以均数为中心线，以X±2S为警告线（用红线画出），以X±3S为失控线（用蓝线画出），作出该批次试剂的质控图框架，每天将随患者样本测定的质量控制物结果标在质量控制框架上，将它们连成线即为质量控制图。

2.3 实验质控的建立，在每次实验中，严格按试剂盒说明书操作，设定空白

阴﹑阳性对照孔，将临界值质控血清与实验标本一同测定。实验结束后算出质控血清的S/CO值，在质控图上找到其相应位置，如果该点落在X±2S范围内，本次实验有效，可发出报告。如果在X±2S范围外，则认为存在显著性误差，本次实验无效，查找原因，重做本实验。

3. 讨论

艾滋病是一种危害较大的传染病，近年来我国发现的HIV感染者和AIDS患者逐年增加，《中国遏制艾滋病行动计划（2001—2005）》明确指出，我国目前已经进入HIV感染的快速增长期[3],且艾滋病已由高危人群向普通人群扩散。为防漏检误检建立外部质控尤为重要。在商品试剂盒内仅配有阳性、阴性对照样品（内部对照）是不够的，为此，建立外部质控（外部对照）以监测本次试验的稳定性，重复性，准确性及提示样品|检验地带网|处于临界状态时的检验操作情况十分必要。由于ELISA法灵敏度高，在加样、温育、洗涤、显色读数等步骤中出现任何误差，则可使临界值结果发生较大变化，而同批样本可发生同样的变化，特别是OD值靠近临界值（Cut off值）或一些处于灰区的样本[4]有可能被错定为假阳性或假阴性。特别要注意向负值偏移的同批样品，可能导致假阴性结果，造成漏检.。

作为初筛ELISA法实验室抗-HIV检测质控的建立，笔者在严格按照说明书操作，在最佳条件下获得20个OD值，这些值呈正态分布，其变异系数为8.1％,说明该血清具有良好的重复性；X±S(1.755～2.065)可信区间为68％，

X±2S(1.6～2.22) 可信区间为95％,X±3S(1.445～2.375) 可信区间为98％。选择X±2S 作为限定外部对照的可接受范围，落在X+2S(1.6～2.22)以外的外质控值将认为实验失效。这一质控标准仅对该批试剂是确定的，在改变批号以后必须重新使用该血清制定相应的质控标准。

参考文献

1 邹雄关于免疫学质控问题的讨论。中华医学检验学杂志，1992；16：218

2 郑怀竞韩松. 临床检验ELISE指南. 北京医科大学、中国协和医科大学出版社，1994；53

3 王德文刘赴平，临床输血与检验，2005；7（1）：53~54

4 文进张斌吉天鹏李兵李惠成刘兰王佑珍,临床输血与检验, 2005;7(2):121

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