定氮仪测定样品中蛋白质的过程详解
定氮仪是测定样品中蛋白质含量的重要仪器,其测定过程主要包括样品消化、定氮仪的准备、样品测定、仪器的清洗和结果计算这几部,为了详细了解定氮仪测定样品中蛋白质的过程,下面我们就来一一进行说明:
1、样品消化:
100ml消化瓶中+样品(固体0.2~2.0g,液体10~20ml)+催化剂(硫酸钾6g、硫酸铜0.2g)+浓H2SO420ml,混合加热至澄清透明的蓝绿色溶液,即消化液。将消化液冷却 ,移入100ml容量瓶定容备用。
2、定氮仪的准备
(1)观察蒸发炉内水位,不能超过不锈钢电极。(如果超过,请先把水排完)
(2)关掉排水阀,打开主电源,打开冷却水,打开绿色蒸汽开关,然后观察电流表。灯电流表指针升到4A(安培)左右,关掉蒸汽开关。待其回到0A(安培)后再打开蒸汽开关。电流升到4A(安培)后再关掉,这样反复开关(0-20)左右直到蒸气从塑料管内喷出,让其喷半分钟左右,关掉蒸气开关,仪器进入正常的待机状态。
3、样品测定
(1)取锥形瓶+2%硼酸10ml+混合指示剂1-2滴放在定氮仪的托架上,在消化管中加入10ml的样品消化液放到蒸馏器上,按国标加入NaOH和H2O,设定好蒸馏时间6分钟,打开蒸汽开关进行蒸馏。
(2)蒸馏结束后,先取下硼酸接受瓶,再关掉蒸气开关,然后戴上手套迅速拿下消化管。
(3)接受瓶中的吸收液用0.05mol/LHCl标准溶液滴定至终点。(平行操作两次)
4、仪器的清洗:
样品测定结束后,用水清洗碱泵多次后关闭冷却水;打开蒸气开关,打开排水阀取下消化管,使蒸发炉内水全部排完。
5、结果计算:
C(V样—V空)HCl ×0.014 × F
蛋白质含量(%)=—————————————————— × 100
m样×(V检/V总)
式中:C------盐酸标准溶液的物质量的浓度(mol/L);
V样-----样品消耗盐酸标准溶液的体积(mL);
V空-----试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积(mL);
0.014-----氮的毫摩尔质量(g/mmol);
m样------试样质量,g;
F------氮换算为粗蛋白质的系数。
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