PCR实验室最容易忽视的环节（二）
3.滤芯吸头
测试吸头需使用经校准的移液器
（1）准确性：将n个吸头分别吸取定量的纯水称重，重量与体积的关系按照1 g/mL换算。
（2）气密性：取n个吸头，吸取最大量程的含有1％甘油的墨水，观察有色液体不出现在滤塞之上，液面相同为合格。
（3）防气溶胶性能：取n个吸头，吸取阳性核酸，反复吹吸10次，换另一个新吸头在阴性纯水中反复吹吸10次，取阴性纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（4）污染物质检：取n个吸头，吸取阴性纯水反复吹吸10次，取阴性纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（5）抑制物质检：取n个吸头，吸取弱阳性质控物反复吹吸10次，然后进行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反复吹吸10次，作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。
4.采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管等
主要考察污染物和抑制物
（1）污染物质检：将n个耗材加入一定量阴性纯水，盖好盖子涡旋1 min后静置30min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（2）抑制物质检：将n个耗材分别加入弱阳性质控物,室温静置30min，然后吸取质控物进行提取;作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。
5.无核酸酶水、PBS等缓冲液
（1）PH值：测量各缓冲液的PH值。
（2）污染物质检：吸取缓冲液作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（3）抑制物质检：将缓冲液分别与RNA核酸和DNA核酸混合，然后吸取混合液作为模板进行扩增，qPCR扩增未被抑制为合格。
6.移液器和离心管架及离心机的内外表面
这些常见物品的外表面容易被核酸和细菌污染，主要查看这两个指标。
（1）表面核酸污染：用沾湿的拭子擦拭上述物品的外表面，然后浸泡到纯水中10min，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（2）移液器内腔核酸污染：对于常用的移液器的内部，可使用无滤芯的吸头在阴性纯水中吹吸10次后，吸取纯水作为模板进行扩增，qPCR无扩增为合格。
（3）表明细菌污染：用沾湿的无菌拭子擦拭上述物品的外表面，划琼脂平板，每个平板的菌落数不应超过一定数量（我也不确定多少合适，由于不要求无菌操作一定会有细菌，但是也不应该太多）。
非瘟和新冠后全国一下子新增了很多核酸检测实验室，早期大家关注的点都在设施和硬件上，但是一个检测实验室开展大量检测工作之后，检测中最弱的环节决定检测的质量。我们也需要将精力放在检测中的每个细节上。
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