标记亲和素生物素法(BA-ELISA)实验——检测未知抗原
实验方法原理 | 亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
实验步骤 | 1. 包被抗体:用0.05 mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液将已知抗体作适当稀释,在每个聚苯乙烯酶标板的反应孔中加0.1 ml,于4 ℃过夜(18~24 h)。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3 min(简称洗涤,下同)。 |
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