病原微生物染色实验——细菌
| 实验方法原理 | 细菌体积较小，可在显微镜油镜下进行观察。细菌中的酸性蛋白质，通过革兰（Gram）碱性染料进行结合，遇革兰碘以后形成复合物，再经过分化剂，则显示革兰阳性菌（+）和革兰阴性菌（-）。常用 Gram 碱性复红-结晶紫革兰法。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 苯胺油-石炭酸-复红染色液：碱性复红 0.5 g，苯胺油 1 ml，石炭酸（苯酚）1 g，30％ 乙醇 70 ml。先将碱性复红溶解于乙醇，加热、冷却后再加入石炭酸和苯胺油。 革兰碘液：碘片 0.5 g，碘化钾 1 g，蒸馏水 150 ml。 结晶紫染色液：结晶紫 2 g，95％ 乙醇 20 ml，草酸铵 1 g，蒸馏水 80 ml，分别将结晶紫溶解于乙醇，草酸铵溶解于蒸馏水，然后进行混合，可使用较长时间。 1. 石蜡组织切片，常规脱蜡至水。 2. 苯胺油-石炭酸-复红染色液染色 5 min，自来水洗 1 min。 3. 蒸馏水洗后，用 40％ 甲醛处理 1 min。 4. 蒸馏水洗 1 min，苦味酸饱和液处理 2 min。 5. 95％ 乙醇快速处理一下，即放入水中，可见组织变红色。 6. 蒸馏水洗 1 min，结晶紫染色液染色 2 min。 7. 自来水洗后 1 min，蒸馏水洗 2 次。 8. 革兰碘液处理 2 min，水洗后用滤纸吸干。 9. 苯胺油与二甲苯等量混合液，进行分化（镜下控制分化程度）。 10. 二甲苯透明，中性树胶封固。 展开 |
| 注意事项 | 1. 苯胺油-石炭酸-复红染色液易产生结晶，染色时适当加热，防止切片污染。 2. 苯胺油与二甲苯分化时，应将切片摇动，便于分色均匀。 |
| 其他 | 结果：革兰阳性菌呈蓝色，阴性菌呈红色。 |
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