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外泌体微泡非特异性标志物总结分析

2020.4.27

外泌体微泡作为细胞间信号传导的重要媒介，越来越多的研究揭示其作为重大疾病生物标志物的临床价值。当前外泌体微泡快速，高通量，多参数的主流分析方法仍为流式分析法。流式分析法主要依赖散射光或者荧光设定分析阈值，划门分析。然而由于外泌体微泡体积远小于细胞，散射光信号弱，传统流式散射光检测灵敏度低，需借助荧光标记才可分析外泌体微泡。其中，非特异荧光标记为外泌体微泡总量分析较为普遍的方法

近日de Rond等人系统研究适合外泌体微泡非特异标记的理想标志物，详细分析Calcein AM， Calcein violet， CFSE， Di-8-ANEPPS和Lactadherin（另外，因Annexin V和Lactadherin同样结合膜磷脂成分，并且依赖于钙离子，无法适用于血液等样品直接标记，膜磷脂结合效率远低于Lactadherin，故不在此研究范围内）等不同类型标记物。因不同标志物标记外泌体微泡效率明显不同，并且对蛋白质聚集体，脂蛋白，细胞碎片等物质的干扰敏感性不同，其效能比较分析需要非常严格的对比信息方有意义。de Rond等人首次借用Apogee纳米流式超高的散射光灵敏度和分辨率，作为不同标志物标记效能分析的参考标准，结合MCF7细胞上清和血小板外泌体微泡样本，详细比较了上述5种标志物识别外泌体微泡的效能情况。

研究统计发现，Di-8-ANEPPS, Lactadherin和超灵敏散射光可以检测到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌体微泡（图1）；Lactadherin和超灵敏散射光可分别检测到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌体微泡（图2）。只有在血小板蛋白质杂志去除后，Di-8-ANEPPS才可以特异识别结合外泌体微泡。Calcein AM， Calcein violet和 CFSE则是检测灵敏度相对较差或极易引起集群检测问题的标志物。因此，截止目前还没有能够同时满足：标记所有外泌体微泡，特异性足够高，与抗体标记兼容，适用生物体液样本直接标记，标记检测时间低于8小时等条件的非特异标志物。然而，该研究也反映出针对不同外泌体微泡样品，选择合适的荧光标志物，结合Apogee纳米流式超灵敏散射光，仍会是当前外泌体微泡流式分析的最佳选择，快速，精准，可靠。

图1，EpCAM+ MCF7 外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析

图2，血小板外泌体微泡散射光和荧光标志物流式分析

参考文献

de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.

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周锦帆