染色体基因定位实验
实验方法原理 | 基因是由平均1000~3000核苷酸组成的序列,在光学显微镜下是难以识别的。为显示染色体上特定基因必须具备以下三个重要条件: 1. 需要具有能与目的基因相特异接合(互补)的核苷酸序列即探针(Probe); 2. 需要有能与探针相结合的标记物(常用同位素和荧光素); 3. 制备出良好的染色体标本。
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
实验步骤 | 一、放射性核素探针掺入程序
Tris-Cl 缓冲液 0.5 M
3H 标记探针 1.0 μg/ml
2. 探针变性
(1)在每张染色体标本上,加100 μg/ml RNA酶50 μl(为去除RNA),置一盖玻片,置于潮湿皿中,37 ℃孵育1 小时;去除盖片,浸入2×SSC 缸中漂洗4 次;
(1)涂片
(1)置已曝光片子浸入下液中 Na2SO4 50.0 mM Na2B4O7 2.5 mM 37 ℃,预处理10~30 秒;
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其他 | 一、结果 成功情况下可见:染色体分带良好、除染色体外,在各处可见散在的、直径1~3 微米的黑色圆形颗粒,有的颗粒位于染色体上,有的位于染色体间。观察50~100 个分裂相,并统计颗粒存在于某号染色体上规律性位点、统计、在特定染色体的特定位点出现机率占8%~40%以上者,可视为该基因的位点。
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