血型检测中ABO血型正反定型不符影响因素分析
作者：刘立坤
作者单位：河北医科大学第三医院输血科
【摘要】 目的应用血型血清学方法分析造成ABO血型正反定型不符的原因，并提出解决方法。方法 应用正反定型、吸收放散试验和唾液血型物质测定试验检测ABO血型正反定型不符标本。分析正反定型不符的原因，并进行正确的红细胞分型。结果 共检查ABO血型正反定型不符标本43例，其中冷自身抗体20例，血浆成分异常7例，亚型6例，抗体缺失及减弱2例，AB抗原性减弱6例，因输血或妊娠发生同种抗体2例。结论 对ABO血型正反定型不符无法定型的血液样本，可以采用其他辅助手段正确鉴定ABO血型，从而保证输血的安全性。
【关键词】 ABO血型系统；正反定型；血型鉴定
ABO血型系统是最早发现也是输血中最重要的血型系统，正确鉴定红细胞血型是确保临床输血安全的首要条件，但在临床实际工作中，常出现ABO血型正反定型不符的现象。本文对我院2009年1月以来ABO正反定型不符的样本进行分析报告如下。
1、资料与方法
1.1 一般资料
我院2009年1月以来住院及门诊患者血型检查者共5683例，其中ABO血型正反不符标本43例。
1.2 试剂
抗A、抗B、抗A+B、抗H、抗A1血清、试剂红细胞悬液AC、BC、OC 、A1C、A2C由长春博德生物制品研究所提供；不规则抗体筛检红细胞及谱细胞由上海血液生物医药有限责任公司提供。
1.3 方法
血型正反定型、吸收放散试验、ABO亚型认定试验、抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验、唾液血型物质测定。以上试验均按文献［1］进行操作。
2、结果
通过对43例血液样本进行ABO正反定型、吸收放散试验、抗体鉴定试验、抗人球蛋白试验、唾液血型物质测定等试验，发现造成ABO血型正反定型不一致的主要原因为冷自身抗体，占总数的46.5%，其它原因有血浆异常占16.3%，血型亚型及AB抗原性减弱均占13.9%，抗体缺失及减弱与同种抗体均占4.6%。见表1。
3、讨论
在鉴定ABO血型时，如果发现正反定型不符，首先要严格按照操作规程，重新抽取一份新鲜标本并使用质量合格试剂重做一次试验，在排除人为因素及技术问题［2］后，根据具体问题做分析。ABO血型正反定型不符的常见原因如下。
3.1 冷自身抗体
本实验中由于冷自身抗体引起的正反定型不符标本有20例占46.5%，冷自身抗体是影响ABO血型定型正反不符最常见的原因。一般健康人血清中含有少量冷凝集素，且效价很低，一般在1∶16以下，在4℃下活性最强，28℃通常不凝聚，但在某些病理条件下，如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、再生障碍性贫血恶性变、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等患者血清中具有高效价的病理性自身冷抗体，作用温度可升高到36℃，通常造成ABO正反定型出现全凝集现象，无法鉴定血液样本的ABO血型。如出现这种现象，可将红细胞和血清分别在37℃预温，并在此条件下进行定型试验。对于自身红细胞已凝集的情况，可用37℃的0.9%氯化钠溶液反复洗涤后再进行红细胞定型试验。对于血清中存在的冷自身抗体可用自身红细胞反复吸收致红细胞不凝集，再进行ABO反定型试验。在冷自身抗体效价太高、血液样本已凝固的情况下，可用巯基乙醇处理红细胞再进行ABO正定型试验［3］。表1 43例ABO血型正反定型不符的原因与结果（略）
3.2 血浆成分异常
本实验中血浆成分异常标本有7例占16.3%，某些肝脏病、多发性骨髓瘤等疾病的患者存在大量异常球蛋白，某些红细胞沉降率增快的疾病又可引起纤维蛋白增高，某些药物如右旋糖苷、聚维酮、羟乙基淀粉等主要为血浆扩溶剂［4］，以上因素均易使红细胞发生缗钱状凝集。此时可加1滴0.9%氯化钠溶液混匀，假凝集即可消失（真凝集不受影响），如果加盐水后仍不消失，可用抗人球蛋白法重新鉴定，即可避免发生假凝集。更严重的假凝集可用0.9%氯化钠溶液置换法，即将血清和细胞混合离心后弃去上清，再加等量0.9%氯化钠溶液1或2次后，假凝集即可消失。
3.3 抗体减弱或缺失
占2例（4.7%），老年人、白血病、骨髓瘤患者、长期接受免疫抑制剂治疗、烧伤、丙种球蛋白缺乏症等都能导致患者抗体减弱，抗体水平下降或消失，会造成反定型困难。如果抗体只是减弱，反定型可以通过增加反应时间或加大血清量并在4℃下放置5～10 min后再进行试验，观察结果。新生儿在出生后才产生抗体，在6个月内自身抗体效价很低反定型可能不凝集或凝集很弱，故新生儿做反定型意义不大。
3.4 抗原性减弱
本文中抗原减弱占6例（13.9%），白血病和有些疾病能引起红细胞抗原性减弱，造成正定型凝集较弱，引起血型误定。可以增加反应时间，在4℃下放置后再做鉴定，此时有必要增做吸收放散试验、唾液血型物质检测实验。并注意与亚型区别。
3.5 血型亚型
实验中血型亚型占6例（13.9%），在健康的献血者和体检者中，亚型是造成ABO血型正反定型不符的主要原因。由于ABO亚型的红细胞抗原性减弱，抗A或抗B的试剂有时不能检测出其抗原性，造成定型困难。其鉴定的主要方法有：在红细胞正定型中加做抗A+B、抗A1、抗H，并观察红细胞与其凝集的强度；在反定型中加做A1C、A2 C；同时加做吸收放散试验，亚型细胞一般具有吸收能力弱而放散能力强或吸收能力强放散能力弱的特点；另外唾液血型物质的检测，也有助于ABO亚型的定型。
3.6 同种抗体
本文中同种抗体占2例（4.6%），同种抗体在人群中检出率为0.3%～2.0%，一般通过妊娠、输血或人体计划免疫产生［5］，引起ABO血型正反定型不一致的同种抗体主要是有Rh、MN、P等血型系统的抗体，当反定型出现OC凝集而自身对照细胞阴性结果时，应考虑到同种抗体的可能性，应用筛选细胞和谱细胞加做抗体筛选及鉴定，本试验中2例同种抗体均为抗E抗体。
除以上因素外，标准血清效价太低、亲和力不强，红细胞悬液过浓、过淡，抗原抗体比例不合适均可以出现弱凝聚或不凝集的现象而导致血型判断错误。
因此在工作中，我们应该仔细核对患者标本，必要时应详细询问患者病情及病史，及时更新输血专业知识，准确鉴定ABO血型，有效地保障临床输血安全。
【参考文献】
1 李勇，杨贵贞主编.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.第1版.北京：中国科学技术出版社，1999.279283.
2 王金敏，刘世荣，乔家骏，等主编.中国输血技术操作规程.第1版.天津：天津科学技术出版社，1998.6162.
3 毛伟，王芳，程磊，等.ABO血型正反定型不一致原因分析.重庆医学，2007，36：21482149.
4 周湘静，陈碧乐，谢作听，等.37例血浆因素引起正反定型不符原因分析.重庆医学，2006，35：452454.
5 黎海澜，焦伟.输血前患者红细胞血型同种抗体筛查与分析.国际输血及血液学杂志，2008，31：2223.
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