随机引物法标记探针
实验概要
本实验探针标记采用TAKARA公司的随机引物标记试剂盒Ver.2。
实验步骤
1．于1.5ml离心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。
2．充分混匀，98°C 3分钟。
3．离心1秒钟，将离心管盖上的汽化水甩下。
4．加入2.5μl dNTPs(各2.5mM)，3μl缓冲液，6μl H2O，1μl Klenow酶。充分混匀，置于冰上，拿到同位素室。
5．加入1μl 32P-dCTP，37°C 10分钟。
6．加入100μl TE，混匀上到已在大管中加好4μl 6N NaOH的Sepherdex-G50柱,室温下3000rpm离心3分钟。
7．再加入100μlTE。室温下3000rpm离心3分钟。
8．将大管中标好的探针加到杂交管中杂交即可。
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