紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素
紫外分光光度法测定酸奶中的纳他霉素
一、 实验目的
1、进一步熟悉紫外分光光度计
2、学习在紫外光谱区测定酸奶中的纳他霉素含量
二、 实验原理
如图,纳他霉素在紫外光谱范围内在280nm处有肩,340 nm以上无明显的吸收,由于纳他霉素含有四烯环,因此在290、303、318 nm处有尖锐的吸收峰,其最大吸收波长为303 nm,且该波长附近吸收值稳定范围较宽,检测器波长即使有小的漂移也不会引起大的检测误差,因此,选择303 nm作为纳他霉素的检测波长既有足够的灵敏度,又有可靠的稳定性能,是理想的检测波长。而酸奶在303nm处干扰物质较少,因而可用紫外分光光度法对酸奶中纳他霉素进行测定。
三、 使用仪器、材料
仪器:紫外分光光度计、石英比色皿、分析天平、快速混匀器、25ml和50ml容量瓶、50ml三角瓶、离心机、500μl和1000μl移液枪
试剂:酸奶,甲醇,冰醋酸,95%纳他霉素标准品,蒸馏水
四、 实验步骤
1、配制纳他霉素标准液
取10mg的95%纳他霉素标准品,用甲醇:冰醋酸:蒸馏水=64:8:28溶液溶解,最后定容于100ml,备用;
分别取上述纳他霉素贮备液500、750、1000、1250、1500、1750、2000μl于7只50ml容量瓶中,用甲醇:冰醋酸:蒸馏水=64:8:28溶液稀释至刻度,摇匀;
2、绘制标准曲线
以甲醇:冰醋酸:蒸馏水=64:8:28溶液为参比,在波长303nm处测定步骤1配制的7个标准溶液的吸光度。
3、样品测定
样品溶液的制备:称酸奶样品2.5克(精确到0.001克),加甲醇16ml,加冰醋酸2ml,振荡摇匀3-5分钟,加水定容于25ml,离心后待用;
以未加纳他霉素的酸奶为空白对照,处理方法同样品溶液的制备。在波长303nm处测定样品的吸光度。
4、回收率和精确度实验
取处理好的酸奶样品2份,1份作为本底值,另1份加入已知质量浓度标准液,分别按上面方法测定纳他霉素含量,再根据测定值计算出纳他霉素的回收率;
相对标准偏差(RSD)或变异系数(CV):用不同仪器测定同一样品,计算实验方法的重现性。
实验数据:
1.绘制标准曲线
紫外分光光度计1
纳他霉素溶液(μg/ml) | 0.95 | 1.425 | 1.9 | 2.375 | 2.85 | 3.325 | 3.8 |
OD303 | 0.096 | 0.146 | 0.199 | 0.242 | 0.292 | 0.342 | 0.394 |
根据表格数据绘制标准曲线:
紫外分光光度计2
纳他霉素溶液(μg/ml) | 0.95 | 1.425 | 1.9 | 2.375 | 2.85 | 3.325 | 3.8 |
OD303 | 0.069 | 0.115 | 0.1530 | 0.196 | 0.232 | 0.273 | 0.312 |
根据表格数据绘制标准曲线:
紫外分光光度计3
纳他霉素溶液(μg/ml) | 0.95 | 1.425 | 1.9 | 2.375 | 2.85 | 3.325 | 3.8 |
OD303 | 0.075 | 0.119 | 0.156 | 0.200 | 0.235 | 0.278 | 0.320 |
根据表格数据绘制标准曲线:
紫外分光光度计4
纳他霉素溶液(μg/ml) | 0.95 | 1.425 | 1.9 | 2.375 | 2.85 | 3.325 | 3.8 |
OD303 | 0.086 | 0.135 | 0.186 | 0.233 | 0.286 | 0.332 | 0.382 |
根据表格数据绘制标准曲线:
2.样品测定
加有纳他霉素的酸奶样品在四台分光光度计下测得的OD值
仪器1 | 仪器2 | 仪器3 | 仪器4 | 平均值 | |
对照 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 |
样品OD303 | 0.145 | 0.128 | 0.125 | 0.135 | 0.13325 |
3.回收率和精确度实验
以已测定样品作为本底值,加入已知质量浓度标准液测得OD303值分别为0.191、0.179、0.176、0.182。
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