脆性X综合征实验诊断的分子生物学检查
（1）Southern 印迹杂交：FMRl基因5’端非编码区CGG异常扩增和其上游CpG岛异常甲基化，使特异性的甲基化酶切位点无法被甲基化敏感的限制性内切酶识别。应用甲基化敏感的限制性内切酶酶切并与探针进行杂交，分析杂交后DNA片段大小，了解CGG重复次数和CpG岛甲基化程度，从而对脆性X综合征进行诊断，Southern一印迹分析是目前最主要的确诊方法。。
（2）常规PCR：检测CGG的重复次数，琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，检测脆性X染色体突变位点的CGG重复情况，及其长度多态性。常规PCR法可诊断出正常和CGG重复次数较少的前突变携带者，但CGG重复次数较多的前突变携带者和全突变患者。无法应用常规PCR法进行诊断。改良，如基因组DNA首先被甲基化敏感的限制性内切酶酶切后，再PCR检测(CGG )n 拷贝数。。
(3)三核苷酸重复引物PCR(TP-PCR):实验操作简便，只需要通过一次PCR扩增，之后行1次毛细管电泳，具有超强的扩增体系，可扩增>1300的CGG重复，对于<200CGG重复，可以算出精确重复数，精确区分1个CGG的差异，独创“锚定引物PCR扩增，可判断出女性基因是杂合子还是纯合子，及AGG的嵌入数，灵敏度高，DNA需求量少。
(4)甲基化特异性多重连接探针扩增技术(MS-MLPA) 技术:能够同时检测FMR1基因拷贝数及其上游 CpG岛甲基化状态, 有助于对前突变、全突变样本 CpG 岛甲基化状态进行确认, 并能检出较为罕见的 FMR1 基因缺失。
推荐
-
技术原理
-
焦点事件
-
焦点事件
